慢病毒介導STAT3-shRNA對胃癌細胞化療敏感性的影響及機制.pdf

1、目的:目前，胃癌已發(fā)展為世界上最常見的惡性腫瘤之一，致死率在惡性腫瘤中居于第二位[1]。隨著醫(yī)療技術發(fā)展，早期胃癌生存率較前顯著提升，但晚期胃癌生存率卻不容樂觀，晚期或轉移型的胃癌患者5年生存率僅為5-20％[2]。對于此類患者而言，化療是其臨床治療策略的關鍵?；熤饕ㄟ^誘導腫瘤細胞凋亡從而發(fā)揮抗腫瘤作用，但由于腫瘤細胞先天或者獲得性對化療耐受，導致胃癌臨床化療效果差，生存率改善不明顯。臨床上僅通過改變化療藥物組合的方式對癌細胞耐藥的

2、改善作用十分有限，迫切需要對如何改善胃癌細胞的化療敏感性進一步探索。隨著分子生物學的快速發(fā)展，對胃癌分子特征的研究不斷深入，能否在基因水平上逆轉胃癌細胞的化療抵抗性引起了廣泛科研工作者關注。
　　信號傳導及轉錄激活因子3（signal transducers and activators of transcription3，STAT3），是轉錄因子家族中的一員，在多種生理及病理過程中扮演著調節(jié)器的關鍵作用。STAT3基因通過轉位到

3、細胞核，與特定的啟動子序列結合，從而發(fā)揮轉錄調控作用，參與調節(jié)細胞的增殖、分化、凋亡、血管生成等生理過程[3]。最近的研究表明，STAT3與多種腫瘤細胞的化療抵抗性有關，但是否在胃癌細胞中也能誘導化療耐受并不明確。
　　方法:1.首先構建靶向STAT3基因的shRNA干擾序列，以慢病毒為載體介導STAT3-shRNA轉染胃癌SGC-7901細胞。以real-time PCR及western blot檢測STAT3-shRNA干擾效

4、果。2.通過MTT法分析干擾STAT3表達后胃癌SGC-7901細胞對5-氟尿嘧啶（5-Fu）化療敏感性的變化；用流式細胞分析儀比較細胞凋亡率的差異；最后通過western blot檢測抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1及survivin的變化，初步探討相關機制。
　　結果：成功構建靶向STAT3基因的慢病毒載體并轉染SGC-7901細胞，有效抑制55％STAT3 mRNA表達和40％STAT3蛋白表達（P＜0.05）。MTT及流式

5、細胞儀檢測顯示干擾STAT3表達后可抑制胃癌SGC-7901細胞增殖，促進腫瘤細胞凋亡(P＜0.05)，western blot顯示STAT3下游靶基因Bcl-2、Mcl-1及survivin蛋白表達水平顯著下降（P＜0.05）。
　　結論：慢病毒介導的STAT3-shRNA可阻斷人胃癌SGC-7901細胞的STAT3信號通路，抑制腫瘤細胞增殖，誘導其凋亡，下調該通路下游的抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1、survivin的活性，