干擾EGFR對胃癌AGS細(xì)胞腫瘤生物學(xué)行為及化療敏感性的影響.pdf

1、目的：
　　檢測表皮生長因子受體（EGFR）干擾對胃癌AGS細(xì)胞系腫瘤生物學(xué)行為如增殖、遷移、侵襲、凋亡、細(xì)胞周期的影響，檢測EGFR干擾對該細(xì)胞系化療敏感性的影響，并初步探究其機(jī)制。
　　方法：
　　設(shè)計表皮生長因子受體siRNA，轉(zhuǎn)染胃癌AGS細(xì)胞，應(yīng)用熒光計數(shù)計算轉(zhuǎn)染率，提取總RNA和蛋白，分別用RT-PCR檢測EGFR mRNA表達(dá)量，蛋白印跡法檢測細(xì)胞中表皮生長因子受體蛋白表達(dá)抑制情況。
　　應(yīng)用cck

2、-8法分析EGFR干擾對胃癌細(xì)胞增殖的影響及對多種胃癌化療藥物化療敏感性的影響。
　　構(gòu)建transwell模型，觀察EGFR干擾對胃癌細(xì)胞遷移、侵襲的影響。
　　應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測EGFR干擾對胃癌細(xì)胞細(xì)胞周期和凋亡的影響。
　　在蛋白水平檢測EGFR傳導(dǎo)通路多個蛋白表達(dá)變化情況。
　　結(jié)果：
　　1.所設(shè)計合成的3條EGFRsiRNA轉(zhuǎn)染胃癌AGS細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率為87％，RT-PCR證實所用siRNA能

3、減少EGFRmRNA的表達(dá)，蛋白電泳顯示干擾組EGFR蛋白表達(dá)抑制作用明顯，相對表達(dá)量顯著下降。
　　2.EGFRsiRNA組細(xì)胞增殖明顯被抑制，與對照組和陰性siRNA組相比有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），在48小時的抑制率高于24小時的抑制率。EGFRsiRNA組細(xì)胞對順鉑、阿霉素、紫杉醇的化療敏感性提高。
　　3.與對照組和陰性siRNA組相比，EGFRsiRNA組細(xì)胞遷移能力和侵襲能力減弱。
　　4.與對照組和陰

4、性siRNA組相比，EGFRsiRNA組細(xì)胞早期凋亡和壞死的細(xì)胞比例增加，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期結(jié)果細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞比例明顯增加。
　　5.蛋白電泳結(jié)果，試驗組AKT和p-AKT表達(dá)有所下降，而Erk和p-Erk無明顯差別。
　　結(jié)論：
　　1.EGFR被干擾時腫瘤細(xì)胞增殖受到抑制，抑制效果有時間依賴性。在胃癌AGS細(xì)胞系干擾EGFR表達(dá)能提高胃癌細(xì)胞對順鉑、阿霉素、紫杉醇的化療敏感性,降低胃癌細(xì)胞遷移和侵襲能力,