干擾EGFR對胃癌AGS細胞腫瘤生物學行為及化療敏感性的影響.pdf

1、目的：
　　檢測表皮生長因子受體（EGFR）干擾對胃癌AGS細胞系腫瘤生物學行為如增殖、遷移、侵襲、凋亡、細胞周期的影響，檢測EGFR干擾對該細胞系化療敏感性的影響，并初步探究其機制。
　　方法：
　　設計表皮生長因子受體siRNA，轉(zhuǎn)染胃癌AGS細胞，應用熒光計數(shù)計算轉(zhuǎn)染率，提取總RNA和蛋白，分別用RT-PCR檢測EGFR mRNA表達量，蛋白印跡法檢測細胞中表皮生長因子受體蛋白表達抑制情況。
　　應用cck

2、-8法分析EGFR干擾對胃癌細胞增殖的影響及對多種胃癌化療藥物化療敏感性的影響。
　　構(gòu)建transwell模型，觀察EGFR干擾對胃癌細胞遷移、侵襲的影響。
　　應用流式細胞儀檢測EGFR干擾對胃癌細胞細胞周期和凋亡的影響。
　　在蛋白水平檢測EGFR傳導通路多個蛋白表達變化情況。
　　結(jié)果：
　　1.所設計合成的3條EGFRsiRNA轉(zhuǎn)染胃癌AGS細胞系轉(zhuǎn)染效率為87％，RT-PCR證實所用siRNA能

3、減少EGFRmRNA的表達，蛋白電泳顯示干擾組EGFR蛋白表達抑制作用明顯，相對表達量顯著下降。
　　2.EGFRsiRNA組細胞增殖明顯被抑制，與對照組和陰性siRNA組相比有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），在48小時的抑制率高于24小時的抑制率。EGFRsiRNA組細胞對順鉑、阿霉素、紫杉醇的化療敏感性提高。
　　3.與對照組和陰性siRNA組相比，EGFRsiRNA組細胞遷移能力和侵襲能力減弱。
　　4.與對照組和陰

4、性siRNA組相比，EGFRsiRNA組細胞早期凋亡和壞死的細胞比例增加，流式細胞儀檢測細胞周期結(jié)果細胞G0/G1期細胞比例明顯增加。
　　5.蛋白電泳結(jié)果，試驗組AKT和p-AKT表達有所下降，而Erk和p-Erk無明顯差別。
　　結(jié)論：
　　1.EGFR被干擾時腫瘤細胞增殖受到抑制，抑制效果有時間依賴性。在胃癌AGS細胞系干擾EGFR表達能提高胃癌細胞對順鉑、阿霉素、紫杉醇的化療敏感性,降低胃癌細胞遷移和侵襲能力,