谷胱甘肽對胃腺癌SGC7901細胞化療敏感性的影響.pdf

1、目的：檢測胃腺癌SGC7901細胞對抗腫瘤藥物多柔比星(ADM)和依托泊苷(VP-16)的敏感性,再聯(lián)合2-氨基4-(S-丁基磺酰亞氨)丁酸(BSO)和乙酰半胱氨酸(NAC)在改變細胞內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)的含量前提下進一步檢測胃腺癌SGC7901細胞對ADM和VP-16的敏感性,分析前后敏感性變化的機制,為臨床胃癌的化療增敏劑藥物研究提供有價值的理論基礎。
　　方法：(1)利用噻唑藍比色法(MTT法)作BSO無毒濃度的測定,

2、同法測定胃腺癌SGC7901細胞對抗腫瘤藥物ADM和VP-16的半數(shù)抑制濃度(IC50)值,作為對照組?；钚匝?ROS)檢測試劑盒檢測胃腺癌SGC7901細胞在BSO的無毒濃度和實驗常選用5mmol/LNAC預處理情況下測定細胞內(nèi)ROS水平,并在20％IC50ADM和20%IC50VP-16濃度的預處理下測定細胞內(nèi)ROS水平,均作為對照組。(2)利用MTT法測定胃腺癌SGC7901細胞在BSO聯(lián)合ADM和BSO聯(lián)合VP-16預處理下的I

3、C50值,同法測定在NAC聯(lián)合ADM和NAC聯(lián)合VP-16預處理的IC50值,并與(1)中對照組進行差異統(tǒng)計學分析。ROS檢測胃腺癌SGC7901細胞在BSO聯(lián)合20%IC50ADM和BSO聯(lián)合20%IC50VP-16預處理下細胞內(nèi)ROS水平,同法檢測NAC聯(lián)合20%IC50ADM和NAC聯(lián)合20%IC50VP-16預處理下細胞內(nèi)ROS水平,并與(1)中對照組進行差異統(tǒng)計學分析。(3)胃腺癌SGC7901細胞在未作BSO和NAC預處理下

4、通過GSH和GSGG試劑盒檢測細胞內(nèi)GSH的含量,作為對照組,進一步檢測BSO在無毒濃度預處理條件下和5mmol/LNAC預處理后細胞內(nèi)GSH的含量,與對照組進行差異統(tǒng)計學分析。(4)胃腺癌SGC7901細胞在未作BSO和NAC預處理下通過γ-谷氨酸-半胱氨酸合成酶(γ-GCS)試劑盒檢測細胞內(nèi)γ-GCS活力,并作為對照組,進一步檢測BSO無毒濃度預處理條件下和5mmol/LNAC預處理細胞內(nèi)γ-GCS的活力,與對照組進行差異統(tǒng)計學分析

5、。(5)胃腺癌SGC7901細胞未作BSO和NAC預處理情況下通過細胞免疫組化觀測細胞膜上MRP1和P-GP表達量,并作為對照組,同法在BSO無毒濃度預處理條件下和5mmol/LNAC預處理后觀測細胞膜上MRP1和P-GP表達量,與對照組進行差異統(tǒng)計學分析。
　　結果：(1)BSO對胃腺癌SGC7901的IC50值為3.5mg/ml,無毒濃度檢測為0.7mg/ml,ADM和VP-16對胃腺癌SGC7901細胞的IC50值分別是3.

6、4ug/ml和17μg/ml。胃腺癌SGC7901細胞在未作任何處理條件下測定的ROS水平為2.73。胃腺癌SGC7901細胞在BSO無毒濃度下預處理測定細胞內(nèi)ROS水平為5.82,5mmol/LNAC預處理細胞內(nèi)ROS水平為0.97,在20%IC50ADM和20%IC50VP-16濃度的預處理下細胞內(nèi)ROS水平分別為5.12和4.29.(2)胃腺癌SGC7901細胞經(jīng)BSO預處理的ADM和VP-16的IC50值分別為1.12ug/ml

7、和4.74ug/ml,與(1)中對照組比較,差異顯著,具有統(tǒng)計學意義(p<0.01),同法NAC預處理的ADM和VP-16的IC50值分別為4.42ug/ml和21.23ug/ml,與(1)中對照組比較,差異顯著,具有統(tǒng)計學意義(p<0.01)。無毒濃度的BSO預處理20%IC50ADM和20%IC50VP-16細胞內(nèi)ROS水平分別為6.30和6.08,與(1)中對照組比較,差異顯著,具有統(tǒng)計學意義(p<0.01)。5mmol/LNAC

8、預處理20%IC50ADM和20%IC50VP-16細胞內(nèi)的ROS水平分別為2.09和3.00,與(1)中對照組比較,差異顯著,具有統(tǒng)計學意義(p<0.01)。(3)胃腺癌SGC7901細胞在未作BSO和NAC預處理下檢測細胞內(nèi)GSH的水平為2.31umol/gprotein,進一步在BSO無毒濃度預處理條件下和5mmol/LNAC預處理檢測細胞內(nèi)GSH的水平分別是0.18umol/gprotein和12.67umol/gprotein

9、,與對照組相比,差異顯著,具有統(tǒng)計學意義(p<0.01)。(4)胃腺癌SGC7901細胞在未作BSO和NAC預處理下檢測細胞內(nèi)γ-GCS活力的水平為10.80umol/gprotein,進一步檢測BSO無毒濃度預處理條件下細胞內(nèi)γ-GCS的活力的水平為7.62umol/gprotein,與對照組比較有明顯統(tǒng)計學意義(p<0.05),然而5mmol/LNAC預處理檢測細胞內(nèi)γ-GCS活力的水平為11.43umol/gprotein,與對照

10、組比較無統(tǒng)計學意義(p﹥0.05)。(5)5mmol/LNAC單獨處理SGC7901細胞后,細胞膜上的MRP1和P-GP與對照組比較無明顯差異(p﹥0.05),通過無毒濃度的BSO處理后,細胞膜上的MRP1和P-gp與對照組比較也無明顯差異(p﹥0.05)。
　　結論：(1)BSO是γ-GCS活性的特異性抑制劑,NAC對γ-GCS的活性無明顯影響。(2)BSO對細胞內(nèi)GSH水平有明顯的抑制作用,聯(lián)合ADM和VP-16能對胃腺癌SG

11、C7901細胞內(nèi)ROS的水平有進一步的提高作用,作為化療藥物的增敏劑有明顯的增敏作用。(3)NAC對細胞內(nèi)的GSH有明顯的促進作用,聯(lián)合ADM和VP-16能對胃腺癌SGC7901細胞內(nèi)ROS水平有明顯的抑制作用,降低了化療藥物對腫瘤細胞的敏感性,為BSO是引起GSH的下降引起的化療敏感性的增強起到很好的佐證(。4)胃腺癌SGC7901細胞膜上的MRP1和P-GP在5mmol/LNAC和無毒濃度BSO的作用下未發(fā)生明顯的表達變化,說明BS