三種中藥有效成分與DNA相互作用的研究.pdf

1、小分子化合物與生物大分子相互作用的研究已經(jīng)成為了化學(xué)生物學(xué)中重要的研究課題。DNA是生物體中重要的一類生物大分子，對(duì)生命密碼的翻譯、轉(zhuǎn)錄、復(fù)制起著非常重要的作用，一方面，DNA靶向化合物成為很重要的核酸探針選擇對(duì)象；另一方面，臨床上使用的許多抗癌藥物都以DNA為作用靶點(diǎn)。為了進(jìn)一步探索和認(rèn)識(shí)DNA的性質(zhì)、結(jié)構(gòu)、行為、形態(tài)，揭開(kāi)生命的奧秘，人們研究了大量小分子與DNA之間的相互作用，并且許多小分子現(xiàn)已成功地用作DNA足跡試劑，定位堿基錯(cuò)配

2、試劑，以及結(jié)構(gòu)探針，而且有助于從分子水平上了解抗癌藥物的作用機(jī)理，為設(shè)計(jì)臨床上更為有效的抗癌藥物提供理論指導(dǎo)。本文在此基礎(chǔ)上主要采用熒光光譜、紫外可見(jiàn)吸收光譜以及粘度等方法研究了抗病毒藥物冰片、丁香酚及大黃素與DNA的相互作用。 本論文主要由以下三部分組成：1冰片與DNA的相互作用研究利用共振光散射、紫外可見(jiàn)吸收光譜以及粘度法研究了冰片與DNA的相互作用。發(fā)現(xiàn)在接近人體生理的條件(pH7.40，溫度37℃)下，冰片與DNA反應(yīng)較

3、迅速，并且反應(yīng)體系至少于12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。這可能是多種抗菌及抗炎中藥的配方中均含有冰片的原因之一。通過(guò)改變反應(yīng)體系的離子強(qiáng)度、pH值及試劑加入的順序，發(fā)現(xiàn)反應(yīng)體系對(duì)離子強(qiáng)度及溶液的pH值具有較強(qiáng)的敏感性，而試劑加入的順序?qū)Ψ磻?yīng)影響不明顯。共振光散射光譜顯示：冰片的加入使緩沖溶液--DNA體系在410、470nm處的共振光散射信號(hào)增強(qiáng)，說(shuō)明冰片與DNA發(fā)生了相互作用。紫外可見(jiàn)吸收光譜的研究表明，冰片導(dǎo)致緩沖溶液--DNA體系在260nm處發(fā)

4、生增色效應(yīng)，并產(chǎn)生4.0nm的紅移，證明了冰片是以嵌入方式與DNA發(fā)生作用的。同時(shí)通過(guò)EB(溴化乙錠)熒光探針競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)和粘度實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：冰片使EB-DNA體系的熒光強(qiáng)度降低，DNA的粘度減小，證明冰片與DNA的作用為嵌插模式，但不能完全嵌入，屬于部分嵌插模式。 2丁香酚與DNA的相互作用研究本章利用共振光散射的方法研究了丁香酚與DNA的相互作用。發(fā)現(xiàn)丁香酚在pH7.40及低離子強(qiáng)度0.0035mol/L條件下，室溫即與DNA發(fā)生反

5、應(yīng)，共振光散射峰出現(xiàn)在420，455，470nm處。結(jié)果表明，丁香酚在DNA表面進(jìn)行了長(zhǎng)距組裝，導(dǎo)致散射光強(qiáng)度急劇增強(qiáng)，且散射光強(qiáng)度與加入DNA的濃度呈線性關(guān)系。另外紫外可見(jiàn)吸收光譜在255nm和317nm處出現(xiàn)等吸收點(diǎn)，說(shuō)明丁香酚與DNA發(fā)生相互作用，形成了復(fù)合物，干擾病毒DNA的復(fù)制。反應(yīng)進(jìn)行平穩(wěn)，且反應(yīng)完成后體系的共振光散射信號(hào)于24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。同時(shí)探討了反應(yīng)的影響因素，優(yōu)化了兩者的反應(yīng)條件。作為一種抑菌系數(shù)較高的中藥成分，丁香酚

6、與DNA的作用較冰片更容易，反應(yīng)體系更穩(wěn)定，作用更持久。 3.大黃素與DNA的相互作用研究本章利用分子熒光光譜法、紫外可見(jiàn)吸收光譜法、粘度法以及與EB的競(jìng)爭(zhēng)性實(shí)驗(yàn)，考察了大黃素與DNA的作用模式。結(jié)果表明：在pH7.40，低離子強(qiáng)度0.03mol/L及恒溫37℃條件下反應(yīng)35分鐘，大黃素與DNA發(fā)生相互作用，各種光譜信號(hào)發(fā)生變化。體系在520nm處的熒光強(qiáng)度隨加入DNA的濃度增加呈遞減趨勢(shì)，紫外可見(jiàn)吸收光譜在380nm和475n