三個中國遺傳性先天性白內(nèi)障家系排除定位及候選基因序列分析.pdf

1、目的： 分析三個具有常染色體顯性遺傳特點的先天性白內(nèi)障家系：CA-001家系、CA-002家系、CA-003家系的臨床表型特征，研究常染色體顯性遺傳先天性白內(nèi)障的分子發(fā)病機制，尋找致病基因及其突變，明確基因型與表型的關(guān)系。 方法： 1.對家系進行詳細的臨床檢查(包括詢問病史、視力、裂隙燈、直接眼底鏡)，排除其他疾患，確定臨床表型。 2.利用連鎖分析進行排除定位提取三個家系成員外周血DNA，選取分布在晶體蛋

2、白基因CRYAA、CRYAB、CRYBB1、CRYBB2、CRYBA1、CRYGC、CRYGD；縫隙連接蛋白基因GJA3(CX46)GJA8(CX50)；膜蛋白基因MIP；在眼前節(jié)發(fā)育中起調(diào)節(jié)作用的基因PITX3、MAF、HSF4；編碼串珠狀纖維結(jié)構(gòu)蛋白-2基因BFSP2上下2厘摩范圍內(nèi)的微衛(wèi)星標記物，利用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增微衛(wèi)星標記物，并利用ABI3130-avant全自動遺傳分析儀讀取微衛(wèi)星標記物的等位基因片段大小，用ABI

3、PrismGeneScanSoftware3.7軟件進行分子量內(nèi)標的檢測和擴增片段大小分析。使用ABIPrismGenotyperSoftware3.7軟件系統(tǒng)讀取等位基因片段大小，進行基因分型。利用MILINK軟件，采用兩點法，計算最大優(yōu)勢對數(shù)(LODScore)值，進行排除定位，確定候選基因。 3.基因序列分析據(jù)連鎖分析結(jié)果，確定候選基因。用ABI3130-avant全自動遺傳分析儀，對CA-001家系進行CRYAB、CRY

4、GC、CRYGD基因測序，對CA-002家系進行CRYBB2基因測序，對CA-003家系進行CRYAB基因測序，以確定家系致病基因。 結(jié)果： 1.CA-001家系家系表型為特殊的珊瑚狀白內(nèi)障。連鎖分析結(jié)果顯示當θ=0.00時，在D2S325得到最高LOD值為1.51，當0=0.00時，在D11S925得到LOD值1.20，支持其與該家系先天性白內(nèi)障疾病相關(guān)候選基因有連鎖關(guān)系；CRYGC/D定位于2q33-q35，CRYA

5、B定位于11q22-q22.3。CRYGD、CRYGC、CRYAB基因可能為該先天性白內(nèi)障疾病相關(guān)候選基因。測序結(jié)果顯示該家系患者CRYGD基因第二外顯子第70位堿基由C突變?yōu)锳，導致第23位的脯氨酸變成了蘇氨酸(P23T)，且這一錯意突變與疾病表型完全共分離。對該先天性白內(nèi)障家系成員直接測序篩查CRYGC基因、CRYAB基因，編碼區(qū)未發(fā)現(xiàn)突變。 2.CA-002家系家系表型為多態(tài)型，雙眼晶狀體皮質(zhì)不均勻混濁，呈白色，2名患者伴

6、眼球水平震顫。連鎖分析結(jié)果顯示當0=0.00時，在D22S315得到最高LOD值為1.20。CRYBB2位于22q11.2，連鎖分析支持CRYBB2基因為該先天性白內(nèi)障疾病相關(guān)候選基因。對該先天性白內(nèi)障家系成員直接測序篩查CRYBB2基因，編碼區(qū)未發(fā)現(xiàn)突變。 3.CA-003家系家系表型為多態(tài)型，雙眼晶狀體皮質(zhì)不均勻混濁或核混濁，呈白色，伴有小角膜和內(nèi)斜。連鎖分析結(jié)果顯示當θ=0.00時，在D3S1569得到最高LOD值為0.9

7、6，當θ=0.00時，在D1S2842、D11S898、D21S266、22S539均得到LOD值0.60。其余LOD值為負值或0。對該先天性白內(nèi)障家系成員直接測序篩查CRYAB基因，編碼區(qū)未發(fā)現(xiàn)突變。 結(jié)論： 1.CA-001家系、CA-002家系、CA-003家系屬于常染色體顯性遺傳先天性白內(nèi)障家系。 2.CA-001家系的致病基因為CRYGD基因，該家系患者CRYGD基因第二外顯子第70位堿基由C突變?yōu)锳，

8、導致第23位的脯氨酸變成了蘇氨酸(P23T)，γD-晶狀體蛋白P23T突變可能是導致該家系白內(nèi)障發(fā)病的主要原因。 3.CA-002家系，初步排除了CRYBB2基因與該家族先天性白內(nèi)障的相關(guān)性。對該家系的基因定位需要更進一步的全基因組掃描，以發(fā)現(xiàn)致病基因在染色體上的可疑區(qū)間。 4.CA-003家系，初步排除了CRYAB基因與該家族先天性白內(nèi)障的相關(guān)性。對該家系的基因定位需要更進一步的全基因組掃描，以發(fā)現(xiàn)致病基因在染色體上的