遺傳性纖維蛋白原缺陷癥和抗凝血酶缺陷癥分子發(fā)病機(jī)制研究.pdf

1、遺傳性纖維蛋白原血癥包括兩種類型：Ⅰ型（低或無纖維蛋白原血癥）和Ⅱ型（異常纖維蛋白原血癥）。Ⅰ型大多數(shù)為常染色體隱性遺傳，表現(xiàn)為纖維蛋白原抗原和活性都非常低或無法測出，Ⅱ型一般為常染色體顯性遺傳，表現(xiàn)為纖維蛋白原正常而活性下降。本研究中對1例無纖維蛋白原血癥家系和4例纖維蛋白原血癥家系進(jìn)行了臨床診斷、家系調(diào)查、表型診斷和基因檢測分析。
　　 1例無纖維蛋白原血癥的患者有明顯的出血癥狀，因外傷導(dǎo)致脾破裂及替代治療后伴發(fā)血栓形成。表

2、型診斷發(fā)現(xiàn)Fg抗原和活性都低于0.5g/L，Western blot分析顯示，患者在血漿稀釋度高于正常對照32倍情況下，F(xiàn)g Bβ鏈缺無，Aα鏈和γ鏈分子量略小于正常。基因診斷發(fā)現(xiàn)患者BβTrp293stop 純合突變、患者母親Bβ Trp293stop 雜合突變，而患者父親為正常。由于其結(jié)果不符合孟德爾遺傳規(guī)律，我們推測患者為單親二倍體。親子鑒定分析16個STR位點(diǎn)發(fā)現(xiàn)除位于4號染色體的FGA外其余位點(diǎn)均證實(shí)其為父子關(guān)系。核型分析患者

3、為正常：46，XY。我們一共設(shè)計了28個位于4號染色體全長的STR位點(diǎn)，STR分析顯示患者有12個STR位點(diǎn)的多態(tài)性全部來源于母親，可以確定患者為4號染色體母源性單親二倍體。因此，患者無纖維蛋白原血癥為Bβ Trp293stop純合突變所致，該突變?yōu)閲H上首次報道，該家系也是第1例在中國人群中發(fā)現(xiàn)因4號染色體單親二倍體導(dǎo)致遺傳性無纖維蛋白原血癥的家系。
　　 本研究對4個纖維蛋白原血癥家系進(jìn)行了表型和基因型診斷。3例異常纖維蛋白

4、原血癥先證者均無任何臨床出血癥狀，因術(shù)前篩查凝血功能時發(fā)現(xiàn)，TT和RT均明顯延長，F(xiàn)g活性降低，分別為0.9g/L, 0.84g/L及0.44g/L，而抗原正常，分別為2.0g/L, 3.2g/L及3.1g/L，其他凝血指標(biāo)及抗凝指標(biāo)都正常；SDS-PAGE和Western blot分析3個先證者的纖維蛋白原均未檢測到異常條帶。1例無纖維蛋白原血癥易發(fā)瘀斑，凝血功能檢查發(fā)現(xiàn)Fg活性和抗原都小于0.5g/L。基因分析發(fā)現(xiàn)4個先證者各攜帶1

5、個基因突變，分別為FGG g.7476 G→A（γ Arg275His）、FGA g.1209 C→T（Aα Pro18Leu）、FGA g.1202 C→T（Aα Arg16Cys）和FGA g.85 G→T（Aα inv1+1G→T）。4個先證者都診斷為遺傳性纖維蛋白原血癥，分別由γ Arg275His、Aα Pro18Leu、Aα Arg16Cys和Aα inv1+1G→T突變所致，其中Aα Pro18Leu、Aα Arg16Cy

6、s和Aα inv1+1G→T突變?yōu)閲鴥?nèi)首次報道。
　　 遺傳性抗凝血酶缺陷癥是一種常染色體顯性遺傳病，發(fā)病率為1/500～1/5000，為靜脈血栓形成的主要危險因素之一。本研究報道了3個遺傳性抗凝血酶缺陷癥的家系，并探討了該病表型和基因型之間的關(guān)系。3位先證者都有明顯的血栓癥狀，表型診斷發(fā)現(xiàn)其AT：A分別為正常人的60％，52％和60％，AT:Ag也降低，分別為16.9mg/dl，14.1 mg/dl和11.4 mg/dl，凝血

7、指標(biāo)以及PC:A 和PS:A 都正常。Western blot檢測結(jié)果顯示3例先證者的血漿AT蛋白分子量正常而含量低于正常?；蚍治霭l(fā)現(xiàn)3 例先證者各攜帶1 個雜合突變，分別為g.8263 T→C（Leu340Phe）、g.5894-6 del TTC（Phe122del ）和g.5898 T→G（Phe123Cys）。3個家系中與先證者表型相似的家系成員，都攜帶有相同的AT基因突變。但除家系2先證者的父親有靜脈血栓外，家系1和3中攜帶

8、相應(yīng)AT基因突變的家庭成員均無血栓發(fā)生。對Phe122del 和Phe123Cys突變進(jìn)行體外表達(dá)研究，ELISA法檢測結(jié)果顯示，突變體轉(zhuǎn)染細(xì)胞后上清液中AT蛋白為野生型的8.73％和7.65％，細(xì)胞裂解液中AT蛋白為野生型的230.45％和276.75％，Western blot檢測細(xì)胞表達(dá)AT蛋白的結(jié)果與ELISA一致。因此，Phe122del 和Phe123Cys突變導(dǎo)致AT蛋白嚴(yán)重的分泌障礙。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，Leu340Phe和Ph