遺傳性無(wú)纖維蛋白原血癥表型及病理機(jī)制的研究.pdf

1、人纖維蛋白原(fibrinogen，F(xiàn)g)即凝血因子Ⅰ，是血漿中含量最高的凝血因子，也是凝血系統(tǒng)中的一“中心”蛋白質(zhì)。凝血的最后階段是凝血酶形成，使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白。纖維蛋白原除直接參與凝血過(guò)程外，還可介導(dǎo)血小板聚集，影響血液粘度，是心、腦血管病發(fā)病的重要危險(xiǎn)因素。Fg基因缺陷可導(dǎo)致遺傳性低(或無(wú))纖維蛋白原血癥，以及異常纖維蛋白原血癥。遺傳性凝血因子和抗凝因子缺陷癥為單基因遺傳性疾病，雖然發(fā)生率并不高，但危害性極大，不僅給患者

2、造成終身的痛苦，而且還可遺傳給后代。對(duì)先證者相關(guān)基因突變的發(fā)現(xiàn)不但有助于優(yōu)生優(yōu)育，而且也為深入認(rèn)識(shí)相關(guān)凝血因子和抗凝因子蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系提供線索。同時(shí)，研究不同的基因突變所引起的臨床表型的差異及其與現(xiàn)有的凝血理論間的矛盾也將有助于完善人們對(duì)機(jī)體凝血與止血機(jī)制的認(rèn)識(shí)。 纖維蛋白原是由Aα、Bβ、γ3條多肽鏈組成的對(duì)稱性二聚體，三條鏈分別由3個(gè)獨(dú)立的基因FGA(M64982)、FGB(M64983)、FGG(M10014)編碼

3、，集中在人類染色體4q28～4q31約50kb的區(qū)域內(nèi)。3條多肽鏈的任何一個(gè)基因缺陷均可導(dǎo)致纖維蛋白原的含量或/和功能異常。遺傳性無(wú)纖維蛋白原血癥(Afibrinogenemia，MendelianInheritanceinManNo.202400)于1920[1]年首次報(bào)道，至今已大約發(fā)現(xiàn)了150例病例，在大多數(shù)病例中呈常染色體隱性遺傳，其中50％發(fā)生在有近親結(jié)婚的家系中。 目的：(1)對(duì)一疑為遺傳性無(wú)纖維蛋白原血癥的患者及其

4、家系進(jìn)行臨床診斷、家系調(diào)查及相關(guān)表型研究。(2)對(duì)1例遺傳性無(wú)纖維蛋白原血癥患者及家系成員的纖維蛋白原三條鏈基因進(jìn)行序列分析，尋找致病突變，分析遺傳規(guī)律，并對(duì)其可能的病理發(fā)病機(jī)制進(jìn)行初步研究。 方法：(1)常規(guī)方法檢測(cè)先證者及其家系成員的血常規(guī)、凝血象、vWF含量、血小板聚集功能；用熱沉淀比濁法檢測(cè)Fg的蛋白含量；Westernblot檢測(cè)先證者及家系成員的血小板α顆粒中Fg及凝血酶敏感蛋白(thrombospondin，TSP

5、)的蛋白水平，血漿Fg三條鏈的含量。(2)酚-氯仿法提取先證者及家系成員基因組DNA，PCR擴(kuò)增Fg三條鏈基因的所有外顯子及側(cè)翼內(nèi)含子序列，序列分析并進(jìn)行網(wǎng)上序列比對(duì)(BLAST)，尋找其基因突變，并與已報(bào)道的相關(guān)文獻(xiàn)及疾病數(shù)據(jù)庫(kù)比較，確定是否為新發(fā)突變。(3)對(duì)突變引起的后果進(jìn)行分析，初步闡明其分子發(fā)病機(jī)制。 結(jié)果：(1)先證者的凝血象檢查發(fā)現(xiàn)：PT120.1秒，APTT300.1秒，TT180.0秒?；颊叩膙WF水平及血小板

6、計(jì)數(shù)均在正常范圍內(nèi)。用Clauss法和熱沉淀比濁法檢測(cè)Fg蛋白含量分別為17mg/dL和18mg/dL。WesternBlot分析患者血小板中Fg與血漿中Fg水平平行下降，且?guī)缀鯔z測(cè)不到；其父母血小板Fg含量基本正常；而血漿Fg三條鏈輕微減低?；颊呒案改傅腁DP誘導(dǎo)血小板聚集率分別為20％，55％和60％。(2)先證者Fg基因共2處突變(按照M64982，M64983和M10014)，F(xiàn)GB基因7969-7972堿基處純合GGGG→GG

7、G以及FGG基因2543堿基處的純合T→A。 結(jié)論：(1)結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù)和家系調(diào)查結(jié)果，臨床診斷該先證者為遺傳性無(wú)纖維蛋白原血癥。(2)患者FGG基因2543堿基處T→A為已報(bào)道的多態(tài)位點(diǎn)，形成γ144位氨基酸的I/K(異亮氨酸/賴氨酸)多態(tài)性。FGB基因7969-7972堿基處純合缺失G(GGGG→GGG)，預(yù)測(cè)將導(dǎo)致β鏈419位氨基酸之后發(fā)生移碼突變，并與435位形成終止密碼子，從而形成缺少β鏈C末端最后27個(gè)氨基酸的截