遺傳性凝血酶原缺陷癥的臨床及基因分析.pdf

1、目的：
　　先天性凝血因子缺陷癥是一類遺傳性出血性疾病。除血友病甲、乙外，其他均為罕見的常染色體隱性疾病。本疾病發(fā)病率低，常幼年發(fā)病，終身受累，臨床表現多樣且存在一定的異質性，有的終身無出血表現，有的出血嚴重，甚至顱內出血。對本類疾病發(fā)生緊密相關基因突變的致病機理研究，有助于明確診斷、合理治療和優(yōu)生優(yōu)育，同時也能夠更深入認識各相關凝血因子的蛋白結構關系，為相關因子的功能研究提供分子基礎，進一步完善和充實機體凝血機制。本研究對1例先

2、天性凝血酶原缺陷癥家系的臨床特點及基因進行研究，為人類凝血酶原缺陷癥的臨床及凝血酶原的結構功能研究提供新思路。
　　方法
　　1.采用PT一期凝固法檢測部分活化的凝血活酶時間(APTT)、凝血酶原時間(PT)、纖維蛋白原含量(FIB)和凝血酶時間(TT)，作為遺傳性凝血酶原缺陷的篩查實驗;根據臨床表現及體征，排除肝腎功能異常，結合ELISA法檢測凝血酶原抗原(FⅡ:Ag)和PT一期凝固法檢測凝血酶原活性(FⅡ:C)作為確診實

3、驗。根據家系成員臨床表現及實驗室檢查，繪制家系圖譜。
　　2.采用聚合酶鏈反應(PCR)結合測序對家系成員F2基因進行分析;同時采用PCR-RLFP技術分析100例正常人該位點以排除基因多態(tài)性。
　　3.從正常肝組織提取mRNA并構建F2真核表達載體;采用PCR介導的重組質粒定點誘變技術構建突變體;利用脂質體法(Lipofactamine2000)真核轉染并表達。PT一期凝固法分析各突變體（凝血酶原）活性及Western B

4、lot檢測抗原。
　　結果：
　　1.先證者男，22歲，無明顯臨床出血表現，凝血酶原抗原為103％，活性僅為2％，屬于遺傳性異常凝血酶原血癥。
　　2.測序發(fā)現先證者的F2基因外顯子13存在新的T24858G純合型突變，致其編碼的凝血酶原發(fā)生Tyr510Asp(Y510D)氨基酸替換，同時先證者F2基因外顯子6存在T165M的SNP位點。
　　3.體外表達試驗中，野生型及突變型培養(yǎng)上清凝血酶原活性均為2％，抗原也