Neurogenesin-1基因促進(jìn)大鼠脊髓損傷后功能修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究大鼠Neurogenesin-1（Ng1）基因?qū)Τ审w脊髓損傷后神經(jīng)生發(fā)及功能恢復(fù)的作用，并初步探討其可能機(jī)制，從而為脊髓損傷修復(fù)提供一種新的實(shí)驗(yàn)研究方法。
　　 方法：將36只大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組18只：實(shí)驗(yàn)組(Groupl，n=18)，對(duì)照組(Group2，n=18)。利用改良Allen法制備大鼠T10脊髓損傷模型后，通過(guò)Alzet微泵分別向?qū)嶒?yàn)組和對(duì)照組持續(xù)轉(zhuǎn)染入Ng1重組質(zhì)粒和空白質(zhì)粒。術(shù)后24h、1

2、周、2周、3周和4周進(jìn)行BBB評(píng)分系統(tǒng)監(jiān)測(cè)大鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況。分別在脊髓損傷后2周和4周處死等量動(dòng)物(n=6)，取材行HE染色，光鏡下比較兩組間脊髓組織形態(tài)學(xué)變化；另將損傷節(jié)段脊髓先固定于戊二醛中，透視電鏡下觀察兩組間脊髓損傷后超微結(jié)構(gòu)的變化。同樣在損傷后2周和4周兩組分別處死等量動(dòng)物(n=6)，行免疫熒光組織化學(xué)方法，觀察內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的存活、增殖、分化等情況。BrdU標(biāo)記增殖的神經(jīng)干細(xì)胞；MAP-2標(biāo)記神經(jīng)元；GFAP標(biāo)記星形膠

3、質(zhì)細(xì)胞；每張切片隨機(jī)選取5個(gè)單位視野分別計(jì)數(shù)染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目，取平均值獲得結(jié)果。
　　 結(jié)果：⑴術(shù)后1周、2周、3周、4周實(shí)驗(yàn)組BBB評(píng)分明顯高于對(duì)照組(P<0.05)；其中術(shù)后4周實(shí)驗(yàn)組BBB評(píng)分為（16.80±1.79）分，功能恢復(fù)情況明顯優(yōu)于對(duì)照組（9.60±1.67）分，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。⑵脊髓損傷后14天，實(shí)驗(yàn)組HE染色組織學(xué)形態(tài)稍好于對(duì)照組。到脊髓損傷后28天，實(shí)驗(yàn)組組織形態(tài)學(xué)基本接近正常脊髓組織。電

4、鏡觀察顯示在損傷后28天,實(shí)驗(yàn)組超微結(jié)構(gòu)明顯好轉(zhuǎn)，只可見少量軸索變性，軸漿內(nèi)線粒體腫脹情形明顯減輕，絕大部分可見嵴突。⑶免疫組織化學(xué)結(jié)果：在脊髓損傷后14天及28天，損傷治療組MAP-2+/BrdU+雙陽(yáng)性標(biāo)記的新分化神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)和BrdU+/GFAP+雙陽(yáng)性標(biāo)記的新分化膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組有顯著性差異(P<0.05)。這表明應(yīng)用Ng1基因治療后的實(shí)驗(yàn)組分化為神經(jīng)元的內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞數(shù)量比對(duì)照組明顯增多，同時(shí)分化為星型膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)量減

5、少。同時(shí),實(shí)驗(yàn)組Nestin+/BrdU+雙陽(yáng)性標(biāo)記的新生內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞數(shù)明顯高于對(duì)照組(P<0.05),表明實(shí)驗(yàn)組中新生的內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞數(shù)量明顯多于對(duì)照組。
　　 結(jié)論：①脊髓損傷區(qū)域通過(guò)Alzet微泵持續(xù)轉(zhuǎn)染入Ng1基因可以給脊髓損傷提供神經(jīng)生發(fā)的環(huán)境，能夠促進(jìn)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖及分化為神經(jīng)元，同時(shí)抑制內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞。②BBB評(píng)分顯示傷后28天實(shí)驗(yàn)組評(píng)分明顯高于對(duì)照組，說(shuō)明脊髓損傷區(qū)域施加Ng1基因