護(hù)理干預(yù)對(duì)大鼠脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)功能修復(fù)的影響.pdf

1、研究背景:
　　脊髓損傷(Spinal cord injury SCI)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central nervous system CNS)的嚴(yán)重?fù)p傷,SCI后往往導(dǎo)致較嚴(yán)重的神經(jīng)功能缺損。而運(yùn)動(dòng)功能障礙是導(dǎo)致患者存活期喪失生活自理能力的最主要原因。SCI患者運(yùn)動(dòng)功能修復(fù)一直是醫(yī)患雙方關(guān)注的焦點(diǎn),而運(yùn)動(dòng)功能訓(xùn)練是臨床脊髓損傷患者運(yùn)動(dòng)功能康復(fù)的重要方法。已有的研究表明,脊髓損傷后臨床早期和持之以恒地進(jìn)行運(yùn)動(dòng)功能護(hù)理干預(yù)可以促進(jìn)脊髓

2、損傷患者運(yùn)動(dòng)功能部分恢復(fù),但其機(jī)制仍不十分清楚,尚需更多基礎(chǔ)研究資料作為支撐。因此,本研究對(duì)脊髓損傷后大鼠進(jìn)行運(yùn)動(dòng)功能護(hù)理干預(yù),利用BBB評(píng)分(Basso,Beattie and Bresnahan score)和斜坡試驗(yàn)(Inclined-plane score IP Score),肌電反應(yīng)和肌濕重檢測(cè),常規(guī)蘇木精-伊紅(Hematoxiline-eosin HE)染色,免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry IHC)

3、染色法等,評(píng)估了護(hù)理干預(yù)對(duì)脊髓損傷后大鼠雙后肢運(yùn)動(dòng)功能變化,腓腸肌電反應(yīng)和肌濕重變化,光學(xué)顯微鏡觀察了脊髓損傷斷面的形態(tài)學(xué)變化,以期尋找護(hù)理干預(yù)在修復(fù)損傷脊髓的運(yùn)動(dòng)功能中的作用和支撐證據(jù)。
　　目的:
　　觀察護(hù)理干預(yù)對(duì)大鼠脊髓損傷后脊髓運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)程度與變化,探討護(hù)理干預(yù)在修復(fù)損傷脊髓功能中的作用,為臨床護(hù)理提供循證依據(jù)。
　　材料和方法:
　　1.分組:將60只SD成年大鼠(約250g,雌雄不限)隨機(jī)分為A

4、組為正常對(duì)照組,B組為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和 C組為實(shí)驗(yàn)組三組(各組均為 n=20);B組和 C組又分為脊髓損傷后1d、7d、30d、60d四個(gè)時(shí)相點(diǎn)(各個(gè)時(shí)相點(diǎn)均為n=5)。
　　2.方法:
　　2.1大鼠脊髓損傷模型制備 B組和C組均采用切割加擠壓L4平面橫斷脊髓制備脊髓損傷大鼠模型。
　　2.2護(hù)理干預(yù)措施 A組大鼠為正常對(duì)照組,B組大鼠脊髓損傷后給予常規(guī)護(hù)理,C組大鼠脊髓損傷后給予護(hù)理干預(yù)。B組和 C組大鼠均于脊髓損傷后

5、1d開始進(jìn)行腹腔注射青霉素鈉20萬U1次/d,連續(xù)注射3d以預(yù)防感染,協(xié)助受傷大鼠排尿、排便2次/d等常規(guī)護(hù)理;C組除常規(guī)護(hù)理之外,還給予按摩膀胱與腹部、關(guān)節(jié)活動(dòng)度訓(xùn)練和肌肉按摩訓(xùn)練等被動(dòng)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練,護(hù)理干預(yù)均于損傷后立即進(jìn)行,以后為2次/d,10min/次/只大鼠。大鼠后肢進(jìn)行被動(dòng)關(guān)節(jié)活動(dòng)訓(xùn)練,具體包括膝被動(dòng)屈伸、膝被動(dòng)外展內(nèi)收,髖被動(dòng)屈伸、髖被動(dòng)外展內(nèi)收,踝被動(dòng)背屈跖屈訓(xùn)練,以維持和改善其關(guān)節(jié)活動(dòng)度;肌肉按壓訓(xùn)練主要以向心性和環(huán)形交替

6、按摩足部、小腿、大腿各肌肉群以減少雙后肢水腫及增加血液循環(huán)。
　　2.3 BBB評(píng)分和斜坡試驗(yàn)各組大鼠采用BBB評(píng)分法及斜坡試驗(yàn)進(jìn)行雙后肢運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分,分別于脊髓損傷后1d、7d、30d和60d四個(gè)相同時(shí)相點(diǎn)檢測(cè),評(píng)估護(hù)理干預(yù)后大鼠脊髓損傷的行為學(xué)變化。
　　2.4肌電反應(yīng)和肌濕重檢測(cè)通過肌電反應(yīng)和肌濕重檢測(cè),觀察大鼠脊髓損傷后1d、7d、30d和60d腓腸肌的肌電反應(yīng)和肌濕重變化,比較護(hù)理干預(yù)后大鼠脊髓損傷失神經(jīng)支配腓腸肌

7、的萎縮程度。
　　2.5常規(guī)HE染色采用組織學(xué)切片行HE染色,以觀察各組各個(gè)時(shí)相點(diǎn)脊髓損傷大鼠的組織修復(fù)情況。
　　2.6免疫組織化學(xué)染色法采用免疫組織化學(xué)法染色顯示各組脊髓損傷大鼠各個(gè)時(shí)相點(diǎn)的神經(jīng)絲蛋白-200(Neurofilament-200 NF-200)和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein GFAP)的變化,觀察脊髓損傷后大鼠經(jīng)護(hù)理干預(yù)后在各組各時(shí)相點(diǎn)中神經(jīng)元的NF-2

8、00免疫反應(yīng)陽性變化和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的GFAP免疫反應(yīng)陽性變化。
　　主要結(jié)果:
　　第一部分:護(hù)理干預(yù)對(duì)大鼠脊髓損傷后脊髓運(yùn)動(dòng)功能修復(fù)的行為學(xué)影響
　　1.BBB評(píng)分和斜坡試驗(yàn)結(jié)果顯示,在脊髓損傷后1d和7d時(shí)相點(diǎn),實(shí)驗(yàn)組與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組相比較,護(hù)理干預(yù)后 BBB評(píng)分和斜坡試驗(yàn)無明顯差異(P>0.05);在脊髓損傷后30d和60d時(shí)相點(diǎn),實(shí)驗(yàn)組較實(shí)驗(yàn)對(duì)照組高(P<0.05),實(shí)驗(yàn)組大鼠后肢功能明顯改善,但實(shí)驗(yàn)組和實(shí)驗(yàn)對(duì)照組

9、得分低于正常對(duì)照組,均未達(dá)到正常水平。
　　2.腓腸肌電反應(yīng)結(jié)果顯示,在脊髓損傷后30d和60d時(shí)相點(diǎn),實(shí)驗(yàn)組和實(shí)驗(yàn)對(duì)照組出現(xiàn)肌纖顫電位,且實(shí)驗(yàn)組較實(shí)驗(yàn)對(duì)照組的腓腸肌纖顫電位波波幅增高(P<0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.腓腸肌濕重稱量結(jié)果顯示,在脊髓損傷后60d時(shí)相點(diǎn),實(shí)驗(yàn)組和實(shí)驗(yàn)對(duì)照組的腓腸肌濕重與正常對(duì)照組相比明顯減輕(P<0.01),實(shí)驗(yàn)對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組相比,實(shí)驗(yàn)組腓腸肌濕重下降較實(shí)驗(yàn)對(duì)照組輕(P<0.05),差異

10、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　第二部分:護(hù)理干預(yù)對(duì)大鼠脊髓損傷后脊髓運(yùn)動(dòng)功能修復(fù)的形態(tài)學(xué)影響
　　1. HE染色結(jié)果
　　脊髓損傷后1d,實(shí)驗(yàn)組和實(shí)驗(yàn)對(duì)照組 HE染色在脊髓損傷區(qū)均可見出血現(xiàn)象和輕度炎性反應(yīng),在損傷的腔隙內(nèi)可見組織碎片;脊髓損傷后7d,損傷區(qū)脊髓組織結(jié)構(gòu)紊亂,大量炎性細(xì)胞浸潤,炎性反應(yīng)加劇,也可見增生的各種細(xì)胞及增生的毛細(xì)血管,神經(jīng)元腫脹、壞死,突起消失;脊髓損傷后30d,實(shí)驗(yàn)組和實(shí)驗(yàn)對(duì)照組均可見脊髓損傷區(qū)炎性反

11、應(yīng)減輕或消失,出現(xiàn)囊腔樣變化或空腔。組織填充處,細(xì)胞增生十分明顯,增生細(xì)胞有一定方向性,呈簇狀排列,增生的組織中見大量增生的毛細(xì)血管;脊髓損傷后60d,損傷部位脊髓組織結(jié)構(gòu)改善,實(shí)驗(yàn)組和實(shí)驗(yàn)對(duì)照組無明顯區(qū)別,可見以損傷區(qū)域?yàn)橹行男纬傻谋容^致密的組織圍繞在空腔周圍,組織細(xì)胞排列較有規(guī)律,走形與脊髓縱軸基本一致。
　　2.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果
　　2.1 GFAP免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,正常對(duì)照組在脊髓灰質(zhì)中 GFAP陽性反應(yīng)

12、細(xì)胞和陽性反應(yīng)纖維清晰可見;在脊髓白質(zhì)中,GFAP免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞和陽性纖維密集,可見 GFAP免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞星狀突起明顯,細(xì)胞多呈不規(guī)則多角形。實(shí)驗(yàn)組和實(shí)驗(yàn)對(duì)照組中的 GFAP免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞表達(dá)隨時(shí)間的推移而逐漸增多,相同時(shí)相點(diǎn)GFAP免疫反應(yīng)陽性未見明顯差異。脊髓損傷后1d,實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組脊髓損傷區(qū)組織結(jié)構(gòu)紊亂,可見 GFAP免疫反應(yīng)陽性的細(xì)胞和纖維,損傷腔隙內(nèi)的組織碎片中見GFAP免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞和陽性纖維。脊髓損傷后7d

13、,實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組損傷區(qū)可見散在 GFAP免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞和陽性纖維,染色較淺,見大量炎性細(xì)胞浸潤。脊髓損傷后30d,實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組損傷區(qū)內(nèi)組織 GFAP免疫反應(yīng)陽性表達(dá)較7d時(shí)增加,GFAP免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞表達(dá)和GFAP陽性纖維表達(dá)增加,且GFAP免疫反應(yīng)陽性纖維交織成網(wǎng)。脊髓損傷后60d,實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組脊髓損傷組織結(jié)構(gòu)紊亂得到改善,損傷區(qū)內(nèi)組織填充,增生區(qū)內(nèi) GFAP免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞和陽性纖維明顯增加,染色加深呈棕褐色并形

14、成膠質(zhì)瘢痕,實(shí)驗(yàn)組與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組比較無明顯差異。
　　2.2 NF-200免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組 NF-200免疫反應(yīng)陽性纖維均呈先下降,隨時(shí)間推移逐漸增高的趨勢(shì);脊髓損傷后1d,實(shí)驗(yàn)組與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組在脊髓損傷區(qū)組織中和損傷間隙內(nèi)的組織塊中見有 NF-200免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞和陽性纖維;脊髓損傷后7d,實(shí)驗(yàn)組與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組在脊髓損傷組織中 NF-200免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞和纖維表達(dá)較脊髓損傷后1d明顯下降,見少量 NF-

15、200免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞和纖維分布;脊髓損傷后30d,實(shí)驗(yàn)對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組 NF-200免疫反應(yīng)陽性表達(dá)隨時(shí)間推移逐漸增高;脊髓損傷后60d,實(shí)驗(yàn)對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組 NF-200免疫反應(yīng)陽性纖維數(shù)量隨時(shí)間推移逐漸增加,在靠近正常脊髓側(cè) NF-200免疫反應(yīng)陽性纖維交織成網(wǎng),在增生組織中可見少量NF-200免疫反應(yīng)陽性纖維。
　　結(jié)果提示:
　　1.護(hù)理干預(yù)可延緩肌肉萎縮速度、改善運(yùn)動(dòng)功能,促進(jìn)損傷脊髓功能的部分恢復(fù)。這可能與早期介入