FSH對人類體外培養(yǎng)卵母細(xì)胞非整倍體發(fā)生的影響.pdf

1、目的： 1．探討不同濃度的FSH對人卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)的成熟率以及卵母細(xì)胞非整倍體發(fā)生的影響； 2．分析FSH濃度對卵母細(xì)胞紡錘體形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響； 3．建立對卵母細(xì)胞極體進(jìn)行非整倍體篩選的方法。 材料與方法： 收集2008年10月～2009年5月中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院生殖中心在進(jìn)行卵胞漿內(nèi)單精子注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）時的不成熟卵母細(xì)胞。將不成

2、熟的GV和MI期卵母細(xì)胞按日期隨機(jī)分到4組含不同濃度FSH（0，5．5ng/ml，22ng．/ml，2000ng/ml）的卵母細(xì)胞體外成熟（in vitro maturation，IVM）培養(yǎng)液中。4～6h觀察一次卵母細(xì)胞成熟情況。在卵母細(xì)胞成熟后立即使用Polscope紡錘體成像系統(tǒng)（MTG，德國）觀察卵母細(xì)胞的紡錘體后并活檢第一極體。活檢后極體與卵細(xì)胞分別固定在載玻片上，采用不同熒光標(biāo)記的五色熒光原位雜交（fluorescent i

3、n situ hybridization，F(xiàn)ISH）探針檢測13、16、18、21和22號染色體。應(yīng)用免疫熒光染色方法分析觀察FSH對體外培養(yǎng)卵母細(xì)胞紡錘體及染色體形態(tài)的影響。 結(jié)果： 共收集來自69例病人的204個不成熟卵子，其中GV期卵子140個，MI期卵子64個。體外培養(yǎng)成熟后共獲得136個成熟卵母細(xì)胞，其中由GV卵子培養(yǎng)成熟84個，成熟率60．0％；由MI期卵子培養(yǎng)成熟52個，成熟率81．5％。4組間GV、MI成

4、熟率的比較均無統(tǒng)計學(xué)差異。 對136個成熟卵母細(xì)胞進(jìn)行第一極體活檢，其中成功活檢131個，成功固定129個第一極體；成功固定了126個活檢后的卵母細(xì)胞，固定成功率為96．1％。對成功固定的129個極體及126個卵母細(xì)胞行熒光原位雜交分析，分別獲得120個可分析的極體FISH結(jié)果及120個可分析的卵母細(xì)胞FISH結(jié)果。極體和卵母細(xì)胞FISH診斷符合率為87．5％。 4組體外培養(yǎng)卵母細(xì)胞的非整倍體發(fā)生率分別26．7％，23．

5、3％，36．7％及63．3％。高濃度FSH培養(yǎng)組（2000ng/ml）非整倍體發(fā)生率顯著高于其他各組（P＝0．002）。在應(yīng)用免疫熒光觀察卵母細(xì)胞紡錘體的形態(tài)中，高濃度（2000ng/ml）與常規(guī)IVM的FSH培養(yǎng)濃度（5．5ng/ml）相比，卵母細(xì)胞紡錘體形態(tài)及染色體分布沒有明顯差異。 結(jié)論： 高濃度FSH增加體外培養(yǎng)卵母細(xì)胞第一次減數(shù)分裂錯誤，從而導(dǎo)致卵母細(xì)胞非整倍體發(fā)生率增加。運用極體活檢和FISH可有效地進(jìn)行卵母