不同成熟培養(yǎng)條件對(duì)豬卵母細(xì)胞體外發(fā)育潛力的影響.pdf

1、本研究的主要目的是評(píng)估培養(yǎng)基(TCM199，NCSU23)、激素和半胱氨酸對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟、體外受精以及體外發(fā)育的影響。利用屠宰場(chǎng)采集的母豬卵巢，用注射器從卵巢表面直徑為3-6mm的卵泡中分離卵母細(xì)胞復(fù)合體(COCs)，用于豬卵母細(xì)胞體外成熟、體外受精及早期胚胎體外發(fā)育的研究。試驗(yàn)內(nèi)容包括：Ⅰ不同成熟培養(yǎng)液對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)的影響；Ⅱ不同階段添加外源激素對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟的影響；Ⅲ不同濃度的半胱氨酸對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟的影響

2、；Ⅳ培養(yǎng)基中添加半胱氨酸對(duì)卵母細(xì)胞內(nèi)GSH水平的影響；Ⅴ成熟培養(yǎng)基中添加半胱氨酸對(duì)卵母細(xì)胞體外受精的影響。試驗(yàn)結(jié)果如下： 1、培養(yǎng)基mTCM199和mNCSU23中各自添加10％豬卵泡液(pFF)后進(jìn)行卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)，試驗(yàn)結(jié)果表明兩種培養(yǎng)基對(duì)豬卵母細(xì)胞的核成熟率沒(méi)有影響。 2、豬卵母細(xì)胞48h體外成熟培養(yǎng)中，前24h添加激素組卵母細(xì)胞的核成熟率顯著高于后24h添加激素組和48h全添加激素組(P<0.05)。

3、 3、半胱氨酸(0、0.05、0.10、0.20mg/ml)對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟影響試驗(yàn)中，0.1mg/ml處理組卵母細(xì)胞的成熟率顯著高于其他三個(gè)組(P<0.05)；0.05mg/ml處理組卵母細(xì)胞成熟率顯著高于對(duì)照組和0.2mg/ml處理組(P<0.05)；對(duì)照組與0.2mg/ml處理組間卵母細(xì)胞成熟率沒(méi)有差異。 4、半胱氨酸(0、0.05、0.10、0.20mg/ml)對(duì)豬卵母細(xì)胞體內(nèi)GSH水平影響試驗(yàn)中，試驗(yàn)結(jié)果表明培養(yǎng)2

4、4h后，各處理組間細(xì)胞內(nèi)GSH的水平差異不顯著；培養(yǎng)36h后，各處理組間細(xì)胞內(nèi)GSH的水平差異不顯著；培養(yǎng)48h后，0.10mg/ml與0.05mg/ml處理組間的GSH水平差異不顯著，但它們與0.20mg/ml處理組和對(duì)照組間差異顯著(P<0.05)。 5、成熟培養(yǎng)基中添加半胱氨酸(0、0.05、0.10、0.20mg/ml)對(duì)成熟后的豬卵母細(xì)胞體外受精率影響試驗(yàn)中,處理組(對(duì)照組、0.05mg/ml、0.10mg/ml、0.

5、20mg/ml)的受精率分別為24.41％、36.59％、41.20％和33.14％。0.10mg/ml與0.05mg/ml處理組間體外受精率差異不顯著，但0.10mg/ml處理組體外受精率顯著高于對(duì)照組和0.05mg/ml處理組(P<0.05)。 總之，在本次實(shí)驗(yàn)條件下，我們的研究結(jié)果表明兩種培養(yǎng)基對(duì)豬卵母細(xì)胞的核成熟率沒(méi)有影響：前24h添加激素能顯著提高卵母細(xì)胞體外成熟率；成熟培養(yǎng)基中添加半胱氨酸能顯著提高豬卵母細(xì)胞體外成熟