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1、廣西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文廣西散發(fā)性結(jié)直腸癌錯(cuò)配修復(fù)基因hMLH1突變研究姓名:徐艷松申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):結(jié)直腸肛門外科指導(dǎo)教師:唐衛(wèi)中20090501廣西散發(fā)性結(jié)直腸癌錯(cuò)配修復(fù)基因hMLHl突變研究碩士學(xué)位論文DNA(n=44),采用PCR方法擴(kuò)增hMLHl基因第8、12、14、15、16外顯子,PCR反應(yīng)體系組成及終濃度:模板DNA25pl,10Xbuffer50u1(25mmol/LMgcl。),02pM上下游引物各1ul,25
2、mmol/1dNTPS4ul,1U/lllTaqDNA聚合酶O5|l1,雙蒸水36ul,反應(yīng)總體系為50u1循環(huán)條件:預(yù)熱94℃3分鐘,變性94℃30秒,退火55—63℃30秒,延伸72℃45秒,共30個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增,最后72℃延t$5分鐘。通過單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析結(jié)合銀染色的方法找出異常條帶,有異常條帶的PCR產(chǎn)物純化后直接進(jìn)行DNA序列測(cè)序。仕甲二日木44ff0結(jié)直腸癌標(biāo)本中,有1例標(biāo)本的SSCP圖片出現(xiàn)異常泳動(dòng)條帶,經(jīng)DNA正反雙向測(cè)
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