錯(cuò)配修復(fù)基因hMSH2、hMLH1與突變型p53在散發(fā)性大腸癌中的表達(dá).pdf

1、目的：檢測(cè)散發(fā)性大腸癌(SCC)患者錯(cuò)配修復(fù)基因(hMSH2與hMLH1)的突變情況，同時(shí)測(cè)定SCC患者突變型p53的表達(dá)情況，分析它們之間的相關(guān)性，并分析hMSH2、hMLH1及p53基因與大腸癌臨床病理之間的關(guān)系，探討hMSH2與hMLH1基因在散發(fā)性大腸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。 方法：以酚一氯仿提取法提取散發(fā)性大腸癌患者的腫瘤組織及正常組織DNA(n=45)，采用PCR方法擴(kuò)增hMSH2基因第5、6、12外顯子，hMLH1基

2、因12、14、16外顯子，p53基因5～6、7及8外顯子。PCR反應(yīng)組成：模板DNA5.0μl，10×buffer5.0μl，上下游引物各1.0μl，dNTPs1.0μl，Taq酶2.0μl，25mmol/LMgcl24.0μl，雙蒸水31.0μl，反應(yīng)總體系為50.0μl。循環(huán)條件：預(yù)熱94℃2分鐘，變性94℃60秒，退火52～58℃60秒，延伸72℃60秒，共35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸5分鐘。通過單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析結(jié)合EB染色的方法

3、找出染色異常條帶，有異常條帶的PCR產(chǎn)物回收后直接進(jìn)行DNA序列測(cè)定，并通過重復(fù)實(shí)驗(yàn)證實(shí)。 結(jié)果： 1.45例大腸癌標(biāo)本中，錯(cuò)配修復(fù)基因(hMSH2與hMLH1)突變率為15.55％，其中，hMSH2基因突變1例，突變率為2.22％，hMLH1基因突變6例，突變率為13.33％。 2.右側(cè)大腸癌hMSH2/hMLH1突變率為38.46％(5/13)，左側(cè)大腸癌的突變率為6.25％(2/32)，兩者之間差異有顯著性

4、(p＜0.05)。28例男性患者h(yuǎn)MSH2/hMLH1基因的突變率為14.28％(4/28)，17例女性患者突變率為17.65％(3/17)，兩者之間差異無顯著性(p＞0.05)。hMSH2/hMLH1基因突變與腫瘤分化(高分化突變率為2/15，中分化為3/21，低分化為2/9)及患者的Dukes分期(A或B突變率為4/24，C或D期突變率為3/21)差異均無顯著性(p＞0.05)。 3.45例大腸癌標(biāo)本中，p53基因突變22例

5、，突變率為48.89％，其中第5～6外顯子突變18例，占81.82％，第7和8外顯子突變各2例。大腸癌p53基因突變率與正常粘膜組織比較差異有顯著性(p＜0.05)。大腸癌p53基因的突變與腫瘤分化程度及臨床分期等臨床病理因素?zé)o關(guān)，但p53基因突變率隨腫瘤分化程度的降低有增高的趨勢(shì)。 4.hMSH2和hMLH1基因在突變型p53陽性表達(dá)的患者中突變率為27.27％(6/22)，在p53未發(fā)生突變的患者中的突變率為4.35％(1/

6、23)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，p＜0.05，有顯著性差異。 結(jié)論： 1.一定比例的散發(fā)性大腸癌中存在MMR基因缺陷，MMR基因突變與臨床病理情況無關(guān)，提示MMR基因突變?cè)诖竽c癌發(fā)生、發(fā)展中屬早期事件。 2.本組大腸癌MMR基因突變中，hMLH1的突變率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于hMSH2，提示散發(fā)性大腸癌中起主要作用的錯(cuò)配修復(fù)基因是hMLH1。 3.MMR基因在右側(cè)大腸癌的突變率明顯高于左側(cè)大腸癌的突變率，表明右側(cè)大腸癌與大腸癌發(fā)