PAK4通過上調突變型p53蛋白的表達降低乳腺癌對多柔比星的敏感性.pdf

1、背景與目的：乳腺癌是女性最常見的腫瘤之一，也是女性癌癥患者的第二大死因，其發(fā)病率逐年增高，且日益年輕化，已成為中國婦女疾病負擔最重的惡性腫瘤之一。化療在乳腺癌綜合治療中的占據(jù)著重要的地位，其中蒽環(huán)類藥物作為乳腺癌的一線化療方案選擇藥物，在臨床治療上得到廣泛應用。但是不同的患者對其敏感性有顯著地個體差異，不同患者的療效不甚相同，甚至有一部分患者產(chǎn)生耐藥，它們并不能從蒽環(huán)類化療方案中明顯獲益。近年來，隨著腫瘤分子生物學和對基因功能的深入研究

2、，人們逐漸認識到，暴露于化療制劑后決定腫瘤細胞命運的主要是基因型而不是制劑的基因毒性，腫瘤細胞相關基因的表達水平是造成對同一化療藥物敏感性不同的主要原因[1]。因此，探尋乳腺癌化療的療效預測因子，明確其耐藥機制可能成為解決乳腺癌化療耐藥問題的關鍵。近來大量研究表明p21-活化激酶4（p21-activated kinase4,PAK4）過表達于人類多種腫瘤組織中[2]，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[3]。而且越來越多的文獻報道，P

3、AK4與化療耐藥有顯著的相關性[4]。PAK4可以降低腫瘤細胞對化療藥物的敏感性[5]，但具體機制仍有待進一步完善。p53是腫瘤抑制基因，但約50％的腫瘤會發(fā)生 p53突變[6]。突變型 P53（mutant-type P53,mtP53）不僅能導致腫瘤的發(fā)生發(fā)展[7]，而且與腫瘤對化療的敏感性有密切的關系[8]。有研究報道，在多柔比星等細胞毒性藥物引起的細胞死亡中，P53起著關鍵作用[9]。存在mtP53的細胞比存在野生型P53(wi

4、ld-type P53,wtP53)更容易產(chǎn)生對包括蒽環(huán)類在內(nèi)的多藥耐藥[10]。P53突變是細胞株對致細胞DNA損傷藥物產(chǎn)生耐藥的最主要原因[11]。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌細胞系中，PAK4蛋白的表達與P53一致。在乳腺癌中，PAK4與mtP53是否存在調控關系，目前的研究尚不清楚，相關研究有待進一步完善。明確 PAK4與mtP53的關系，可能能夠為乳腺癌的治療，特別是逆轉化療耐藥，提供一個新的治療靶點。
　　材料和方法：

5、本實驗通過在MDA-MB-231細胞中建立過表達和干擾PAK4的細胞株，采用細胞增殖實驗來研究PAK4對乳腺癌細胞增殖的影響；采用藥物敏感性實驗來研究PAK4對乳腺癌細胞化療敏感性的影響；采用Western Blot及實時熒光定量PCR進一步探索PAK4影響乳腺癌細胞生物學行為的機制；利用免疫組織化學方法檢測乳腺癌組織中PAK4與mtP53的表達情況。應用SPSS17.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，采用卡方檢驗分析PAK4與mtP53表達在乳

6、腺癌中的相關性。P≤0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.細胞增殖實驗及平板克隆形成實驗結果顯示，過表達PAK4后，MDA-MB-231細胞的增殖能力明顯上升；而干擾PAK4后乳腺癌細胞增殖能力明顯下降。
　　2.藥物敏感性實驗中，過表達PAK4后，MDA-MB-231細胞對多柔比星的敏感性明顯降低；而干擾PAK4后，MDA-MB-231細胞對多柔比星的敏感性明顯升高。
　　3.Western Bl

7、ot結果顯示，過表達PAK4后，p-ATM（Ser1981）、p-Chk2(Thr68)、p-P53(Ser15)及 mtP53蛋白含量增加；干擾 PAK4后， p-ATM（Ser1981）、p-Chk2(Thr68)、p-P53(Ser15)及mtP53蛋白含量降低。而總ATM蛋白含量一直不變。
　　4. RT-PCR結果顯示，無論是上調還是下調PAK4mRNA水平后，mtP53在mRNA水平均無明顯變化。
　　5. PA