RNAi技術阻斷多藥耐藥基因表達提高乳腺癌化療敏感性.pdf

1、本文對RNAi技術阻斷多藥耐藥基因表達提高乳腺癌化療敏感性進行了探討。本研究選用耐阿霉素人乳腺癌細胞系MCF7/ADR及其藥物敏感細胞系MCF7作為研究對象。設計合成一對針對mdr1基因的shRNA，定向克隆入真核表達載體pENTR<'TM>/U6，構建pENTR<'TM>/U6 MDR1重組質(zhì)粒，然后轉化質(zhì)粒到大腸桿菌中，經(jīng)過克隆、擴增、純化后慢病毒包裝，轉染進MCF7/ADR細胞；空載體pENTR<'TM>/U6轉染作為對照，10μ

2、g/ml Blasticidin篩選2周，存活的轉導細胞為篩選的靶基因沉默細胞，用流式細胞術從蛋白水平檢測P-gp的表達率，羅丹明試驗測定P-gp功能變化，逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)分析，從基因轉錄水平檢測MDRl基因的表達率，MTT法檢測阿霉素對MCF-7/ADR細胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)。研究表明：經(jīng)RNAi后，MCF-7/ADM細胞系mdr1mRNA表達下降，p-gp表達水平下調(diào)，MTT法測試對ADM敏感性增加。shR