rhG-CSF抑制血管損傷后新生內(nèi)膜增生的實驗研究.pdf

1、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病是世界上最常見的心臟病，有高的發(fā)病率和死亡率，嚴(yán)重威脅到了人類的健康。PTCA（percutaneous transluminal coronary angioplasty PTCA）和支架安置術(shù)是目前冠心病血管重建治療的主要手段，但術(shù)后再狹窄的發(fā)生極大的限制了其遠(yuǎn)期療效。已知正常條件下血管內(nèi)皮產(chǎn)生各種各樣的物質(zhì)來調(diào)節(jié)血管緊張度、保護(hù)血管壁，血管損傷時表現(xiàn)為有效的血管舒張性活性的降低，抗粘附物質(zhì)的減少，及伴發(fā)的血

2、管收縮物質(zhì)的增加，從而導(dǎo)致血管緊張度的增加，炎性細(xì)胞和血小板的粘附，中層平滑肌細(xì)胞的遷移和增殖，這都增加了血栓形成和脈管阻塞及新生內(nèi)膜形成的危險。已有實驗證實新生內(nèi)膜增生程度與內(nèi)皮剝脫范圍成正比，平滑肌細(xì)胞及新生內(nèi)膜異常增生的情況往往存在于損傷后沒有內(nèi)皮化或內(nèi)皮化延遲的區(qū)域。而新生內(nèi)膜的形成是血管再通術(shù)（如血管成形術(shù)，支架術(shù)和旁路移植術(shù)）后再狹窄的病理基礎(chǔ)，因此內(nèi)皮細(xì)胞功能和結(jié)構(gòu)的完整性對于預(yù)防血管損傷后再狹窄至關(guān)重要。 修復(fù)

3、受損的內(nèi)皮細(xì)胞是防治損傷性血管疾病的重要靶點，重組人粒細(xì)胞集落刺激因子（recombinant huanm granulocyte colony-stimulating factor, rhG-CSF）被證明可以刺激骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cells，EPCs）釋放到外周血，而EPCs己經(jīng)證明可以參與損傷組織血管的新生，因此rhG-CSF介導(dǎo)的內(nèi)皮祖細(xì)胞的動員對于血管損傷后早期的內(nèi)皮化及阻止新生內(nèi)膜

4、的形成可能有治療性的作用。然而，目前rhG-CSF在抑制損傷血管新生內(nèi)膜形成中的治療作用研究的極少，對其治療效果也存在爭議。 由于在心血管疾病及其危險因素（如：動脈粥樣硬化，高脂血癥等）存在的情況下內(nèi)皮祖細(xì)胞的功能會有所改變，因此，本試驗在建立動脈粥樣硬化大鼠模型的基礎(chǔ)上，行頸總動脈球囊損傷術(shù)，應(yīng)用rhG-CSF進(jìn)行術(shù)前干預(yù)，觀察其對動脈粥樣硬化血管損傷后內(nèi)皮再生的影響及對新生內(nèi)膜增生的影響。 第一部分大鼠動脈粥樣硬化

5、模型的建立 目的：建立大鼠動脈粥樣硬化模型，使疾病模型更接近人類。 方法： 14大鼠隨機分為兩組：普食組和高脂組。普食組給予普通飲食,高脂組采用大劑量VitD3灌胃+高脂飲食的方法建立Wistar大鼠動脈粥樣硬化模型。高脂飲食后一月測定外周血血脂和血鈣水平，同時在光鏡和透射電鏡下觀察血管壁形態(tài)改變。 結(jié)果：高脂組大鼠血脂、血鈣水平顯著升高（p<0.01），光鏡和電鏡下血管壁均可見泡沫樣細(xì)胞和鈣鹽沉積等動脈粥樣硬

6、化病變。 結(jié)論：在大劑量VitD3灌胃基礎(chǔ)上飼高脂飼料能造成大鼠動脈粥樣硬化模型。 第二部分重組人粒細(xì)胞集落刺激因子對動脈粥樣硬化大鼠頸總動脈球囊損傷后再內(nèi)皮化的影響 目的：在大鼠動脈粥樣硬化的基礎(chǔ)上，觀察rhG-CSF皮下注射對損傷血管再內(nèi)皮化的影響并研究其機制。 方法： 66 只大鼠隨機分為2組：普食組和AS組，AS組又隨機分為：rhG-CSF＋AS損傷組、NS+AS損傷組。普食組和rhG-CSF＋A

7、S損傷組皮下注射rhG-CSF共6d，NS+AS損傷組皮下注射NS共6天。然后行左頸總動脈球囊拉傷術(shù)。采用光鏡及掃描電鏡觀察不同時間點損傷血管內(nèi)皮再生情況，采用流式細(xì)胞儀觀察外周血EPCs數(shù)量，采用酶聯(lián)免疫分析法觀察外周血IL-6、TNF-α表達(dá)水平的變化。 結(jié)果：經(jīng)rhG-CSF干預(yù)后，與NS干預(yù)組相比損傷血管再內(nèi)皮化明顯加速。損傷后16天rhG-CSF干預(yù)組內(nèi)皮再生面積占血管腔面積百分比較NS組明顯增加（0.93±0.05

8、1 VS 0.20±0.033，P<0.01）。同時rhG-CSF干預(yù)組血EPCs數(shù)量明顯增加，而炎性因子的水平較NS干預(yù)組明顯減少。 結(jié)論： AS大鼠皮下注射rhG—CSF后可以使損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞更快恢復(fù)連續(xù)性，rhG—CSF可能通過增加外周血EPCs數(shù)量，抑制炎性因子（IL－6、TNF-α）的表達(dá)，參與了內(nèi)皮細(xì)胞再生，內(nèi)膜的修復(fù)過程。通過皮下注射rhG—CSF使內(nèi)皮細(xì)胞缺損區(qū)域重新覆蓋上內(nèi)皮細(xì)胞成為可能，對抑制損傷血管新生

9、內(nèi)膜的增生具有重要的治療意義。 第三部分重組人粒細(xì)胞集落刺激因子對動脈粥樣硬化大鼠頸總動脈球囊損傷后新生內(nèi)膜增生的影響 目的：觀察rhG-CSF皮下注射對AS大鼠血管損傷后新生內(nèi)膜增生的影響。 方法： 72只大鼠隨機分為球囊損傷NS組、球囊損傷rhG－CSF組，術(shù)前分別予以皮下注射rhG-CSF/NS干預(yù)，然后行左頸總動脈球囊拉傷術(shù)，光鏡下觀察損傷后不同時間點新生內(nèi)膜增生情況。 結(jié)果：球囊損傷rhG－