rhG-CSF對(duì)Aβ-,1-42-誘導(dǎo)Alzheimer病大鼠模型的作用研究.pdf

1、目的:阿爾茨海默病(AD)是老年人最常見(jiàn)的神經(jīng)變性性疾病。其核心癥狀為進(jìn)行性認(rèn)知功能減退。在發(fā)達(dá)國(guó)家老年人群中，為導(dǎo)致死亡的第四位原因，對(duì)人類健康與生命構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅，受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。迄今為止，對(duì)于AD尚無(wú)特效治療方法。粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)是一種重要的造血生長(zhǎng)因子，臨床上主要用于白血病的治療。近來(lái)在治療腦缺血?jiǎng)游飳?shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)G-CSF能明顯減小腦梗死面積，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)，降低動(dòng)物的死亡率，具有一定的神經(jīng)保護(hù)作用

2、。但在老年癡呆中的作用，未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究主要探討G-CSF對(duì)老年癡呆模型大鼠認(rèn)知障礙的改善以及抗凋亡方面的作用。 方法：(1)選用智能正常的健康雄性Wistar大鼠84只，體重250g±20g。(2)隨機(jī)分為A β組、粒細(xì)胞集落刺激因子治療組及假手術(shù)組，共3組，每組28只。(3)麻醉成功后，固定于腦立體定向儀上，頭項(xiàng)部正中切口暴露前囟。參照大鼠腦立體定位圖譜，A β組、粒細(xì)胞集落刺激因子治療組雙側(cè)海馬注射Aβ 1-42各5u

3、l(10ug)，假手術(shù)組雙側(cè)海馬注射生理鹽水5ul。(4)13天后，進(jìn)行morris水迷宮訓(xùn)練5天，記錄第五天的逃避潛伏期，Aβ組、粒細(xì)胞集落刺激因子治療組明顯高于假手術(shù)組，說(shuō)明造模成功。(5)Aβ組給予皮下注射生理鹽水O.3ml/kg·d，連續(xù)7d；粒細(xì)胞集落刺激因子治療組皮下注射粒細(xì)胞集落刺激因子50μg(0.3m1)/kg·d，連續(xù)7d。并于給藥后第7、14、21、28d進(jìn)行Morris水迷宮測(cè)試，記錄其逃避潛伏期和目的象限游泳距

4、離百分比。(6)每次測(cè)試后每組處死7只大鼠，灌注取腦，制作石蠟切片，并用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)海馬區(qū)caspase-3的表達(dá)。(7)采集圖象，計(jì)數(shù)免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，數(shù)據(jù)用SPSSl1.5 forWindows軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。數(shù)據(jù)以x±s表示，采用方差分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：(1)Morris水迷宮測(cè)試結(jié)果：Morris水迷宮成績(jī)測(cè)試，隨著訓(xùn)練的進(jìn)行，各組大鼠逃避潛伏期逐漸縮短。記錄第5天成績(jī)，Aβ組及粒

5、細(xì)胞集落刺激因子治療組與假手術(shù)組相比，逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.01，A β組及粒細(xì)胞集落刺激因子治療組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明造膜成功；A β組及粒細(xì)胞集落刺激因子治療組在注射藥物后第7，14，21，28天分別行Morris水迷宮測(cè)試，A β組于第14、21、28d，逃避潛伏期(與第7天比較)明顯延長(zhǎng)(P<0.05)；粒細(xì)胞集落刺激因子治療組于不同時(shí)間點(diǎn)逃避潛伏期相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；給予粒細(xì)胞集落刺

6、激因子治療后，粒細(xì)胞集落刺激因子治療組與Aβ組相比，于第14、21、28d逃避潛伏期明顯縮短(P<0.05)。(2)目的象限游泳距離占總距離的百分比(目的象限百分比) A β組大鼠于第21、28d，目的象限百分比(與第7天比較)明顯延長(zhǎng)(P<0.05)；給予粒細(xì)胞集落刺激因子治療后，于第14、21、28d目的象限百分比(與第7天比較)明顯增加(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。給予粒細(xì)胞集落刺激因子治療后，粒細(xì)胞集落刺激因子治療組與Aβ

7、組相比，于第14、21、28d目的象限百分比明顯延長(zhǎng)(P<0.05)(3)大鼠海馬組織病理學(xué)觀察及超微結(jié)構(gòu)觀察：HE染色顯示，Aβ組大鼠海馬CAl區(qū)神經(jīng)元數(shù)量較假手術(shù)組明顯減少，可見(jiàn)較多的神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)濃染，核固縮。粒細(xì)胞集落刺激因子治療組神經(jīng)元數(shù)量較A β組增多，胞質(zhì)濃染神經(jīng)元少見(jiàn)。(4)caspase-3蛋白主要在大鼠海馬CAl區(qū)錐體細(xì)胞表達(dá)，陽(yáng)性反應(yīng)為黃色到棕褐色，定位于胞漿，亦可見(jiàn)于胞膜和胞核。免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠海馬組織Cas

8、pase-3蛋白的表達(dá)：假手術(shù)組于各時(shí)間點(diǎn)均可見(jiàn)海馬區(qū)Caspase-3免疫陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)(見(jiàn)圖5～8)，各時(shí)間點(diǎn)相比(與第七天)免疫細(xì)胞表達(dá)數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；注射A β1-42后，Aβ組、粒細(xì)胞集落刺激因子治療組與假手術(shù)組相比較各時(shí)間段大鼠海馬區(qū)Caspase-3蛋白的表達(dá)明顯增加(P<0.05)；給予粒細(xì)胞集落刺激因子后，治療組caspase-3蛋白的表達(dá)明顯降低，第7、14天較A β組明顯減少，統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異(P