rhG-CSF及rhGM-CSF單獨或聯(lián)合應(yīng)用對小鼠T細(xì)胞免疫功能影響的實驗研究.pdf

1、目的：急性移植物抗宿主病(aGVHD))是異基因造血干細(xì)胞移植(allo-HSCT)的常見并發(fā)癥，aGVHD主要由T細(xì)胞介導(dǎo)。rhG-CSF是異基因外周血造血干/祖細(xì)胞(PBPCs)動員最常用的細(xì)胞因子。最近國內(nèi)外大量臨床事實表明rhG-CSF動員可誘導(dǎo)外周血T細(xì)胞免疫耐受， rhG-CSF作為T細(xì)胞免疫耐受調(diào)節(jié)劑已得到國內(nèi)外許多學(xué)者的認(rèn)可。rhGM-CSF也是一種常用的干細(xì)胞動員劑，但因其副作用大、動員效果差已被G-CSF所取代，也有

2、研究表明rhG-CSF聯(lián)合rhGM-CSF動員可得到很好的動員效果，尤其是在一些單用rhG-CSF動員失敗的患者。rhGM-CSF對GVHD的影響各家報道不一，有報道認(rèn)為單用rhGM-CSF動員與單用rhG-CSF動員或聯(lián)合應(yīng)用rhGM-CSF和rhG-CSF動員相比可使aGVHD發(fā)生率明顯減低；也有研究表明聯(lián)合應(yīng)用rhGM-CSF和rhG-CSF動員與單用rhG-CSF動員或單用rhGM-CSF動員相比可減少GVHD的發(fā)生率。

3、 本研究的目的是探討重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)及重組人粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF)單獨或聯(lián)合應(yīng)用對小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞數(shù)量和功能的影響及其機(jī)制。 方法： 將近交系的BALB/C小鼠隨機(jī)分四組如下：rhG-CSF組： rhG-CSF 250 μg·kg-1·d-1皮下注射，1～5天； rhGM-CSF組：rhGM-CSF 250 μg·kg-1·d-1皮下注射，1～5天；聯(lián)合

4、組：rhG-CSF、rhGM-CSF各250 μg·kg-1·d-1皮下注射，1～5天；對照組：等量生理鹽水皮下注射，1～5天。最后一次注射完后24小時將小鼠的脾臟制成單個核細(xì)胞懸液，應(yīng)用MTT法檢測各組T淋巴細(xì)胞的增殖能力；應(yīng)用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞因子處理后的各組T淋巴細(xì)胞和亞群、共刺激分子CD28、抑制性T淋巴細(xì)胞(CD8+CD28-、CD4+CD25+)以及樹突狀細(xì)胞DC1(CD11c+)、DC2(CD11c-)的數(shù)量進(jìn)行測定；應(yīng)用半

5、定量RT-PCR測定細(xì)胞內(nèi)IL-4mRNA、IFN-γmRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1.細(xì)胞因子處理后T淋巴細(xì)胞增殖能力的變化經(jīng)rhG-CSF、rhGM-CSF單獨或聯(lián)合應(yīng)用后T淋巴細(xì)胞增殖能力均下降(P＜0.05)，下降的程度rhGM-CSF組較rhG-CSF組、聯(lián)合組更明顯(P＜0.01)，rhG-CSF組與聯(lián)合組比較無明顯差異(P＞0.05)。 2.細(xì)胞因子處理后淋巴細(xì)胞數(shù)量及T細(xì)胞亞群的變化rhG-CSF

6、組、rhGM-CSF組及聯(lián)合組淋巴細(xì)胞和T細(xì)胞亞群與對照組比較均有下降(P＜0.05)，其中rhGM-CSF組CD3+、CD4+細(xì)胞下降更明顯(P＜0.05)，rhGM-CSF組和聯(lián)合組CD8+細(xì)胞下降較明顯(P＜0.05)，但兩組之間比較無顯著性差異(P＞0.05)；CD4+/CD8+細(xì)胞的比值rhGM-CSF組明顯低于其它各組(P＜0.05)。 3.細(xì)胞因子處理后共刺激分子CD28的變化rhG-CSF組、rhGM-CSF組及

7、聯(lián)合組CD3+CD28+細(xì)胞與對照組比較均下降(P＜0.05)，其中rhGM-CSF組CD3+CD28+細(xì)胞下降更明顯(P＜0.05)，rhG-CSF組、rhGM-CSF組及聯(lián)合組CD4+CD28+、CD8+CD28+細(xì)胞均較對照組有所下降，但各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 4 細(xì)胞因子處理后抑制性T淋巴細(xì)胞的變化抑制性T淋巴細(xì)胞CD4+CD25+在rhG-CSF組、rhGM-CSF組及聯(lián)合組均較對照組增加，且有統(tǒng)計學(xué)意義(P

8、＜0.05)，rhGM-CSF組增加最顯著(P＜0.05)；CD8+CD28-細(xì)胞占有核細(xì)胞的數(shù)量在rhG-CSF組、rhGM-CSF組及聯(lián)合組較對照組均增加(P＜0.05)，其中以rhGM-CSF組上升最顯著(P＜0.05)。 5 細(xì)胞因子處理后樹突狀細(xì)胞的變化rhG-CSF組、rhGM-CSF組、聯(lián)合組與對照組相比顯著增加了DC2的含量(P＜0.05)，聯(lián)合組DC2的含量明顯少于rhG-CSF組和rhGM-CSF組，DC1的

9、含量各組無變化(P＞0.05),rhG-CSF組、rhGM-CSF組、聯(lián)合組DC1/DC2比值與對照組相比顯著下降(P＜0.05)，其中rhGM-CSF組下降最明顯(P＜0.05)。 6 細(xì)胞因子處理后IL-04mRNA和INF-γmRNA表達(dá)的變化rhG-CSF組、rhGM-CSF組、聯(lián)合組與對照組比較IL-4mRNA表達(dá)水平均升高(P＜0.05)，其中rhGM-CSF組升高較rhG-CSF組和聯(lián)合組更明顯(P＜0.05)，聯(lián)

10、合組升高較rhG-CSF組顯著(P＜0.05)；rhG-CSF組與對照組比較INF-γmRNA表達(dá)水平下降(P＜0.05)，rhGM-CSF組與對照組比較INF-γmRNA表達(dá)水平升高(P＜0.05)，聯(lián)合組與對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；但I(xiàn)NF-γmRNA/IL-4mRNA比值rhG-CSF組、rhGM-CSF組、聯(lián)合組與對照組比較均下降(P＜0.05)，rhGM-CSF組及聯(lián)合組下降較rhG-CSF組更明顯(P＜0.

11、05)，rhGM-CSF組及聯(lián)合組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論： 1.rhG-CSF作為動員劑可誘導(dǎo)外周血T細(xì)胞免疫耐受，可減輕異基因造血干細(xì)胞細(xì)胞移植后aGVHD的發(fā)生率。 2.rhGM-CSF作為動員劑在體內(nèi)誘導(dǎo)異基因造血干細(xì)胞移植供者外周血T細(xì)胞免疫耐受，可減輕急性GVHD的發(fā)生率。 3.rhGM-CSF、rhG-CSF作為造血干細(xì)胞細(xì)胞移植動員劑均能夠誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞免疫耐受，兩者聯(lián)用后協(xié)同