EZH2調(diào)控腎癌細胞生物學(xué)作用研究.pdf

1、研究背景:
　　腎細胞癌是泌尿系統(tǒng)常見惡性腫瘤,早期腎癌以外科手術(shù)切除為主,而晚期轉(zhuǎn)移腎癌因?qū)Ψ?、化療不敏?目前以靶向治療及輔助治療為主。然而多項多中心III期臨床實驗研究發(fā)現(xiàn),目前的腎癌靶向藥物針對晚期腎癌患者還存在完全緩解率低的問題,臨床療效尚不能令人滿意,尋找新的腎癌藥物靶點成為當前迫切需解決的問題。
　　果蠅zeste基因增強子的人類同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)是一種

2、轉(zhuǎn)錄抑制因子,可明顯抑制抑癌基因或腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達,最新研究表明,EZH2參與了腎癌的發(fā)生、發(fā)展,但其具體作用機制仍不明。
　　RUNX3是RUNT家族的核心成員,RUNX3基因是TGF-β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路下游的一個轉(zhuǎn)錄因子,參與TGF-β介導(dǎo)的生長抑制作用,研究表明RUNX3的缺失或失活與乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌和胃癌等腫瘤的發(fā)生相關(guān),通過ChIP實驗證實在這些腫瘤中EZH2可結(jié)合于RUNX3的啟動子區(qū),從而抑制其表達

3、,RUNX3是EZH2的直接調(diào)控靶分子。然而其在腎癌中是否有相同作用還有待進一步明確。
　　目的:
　　研究EZH2與腎癌臨床病理間的關(guān)系,通過體外細胞學(xué)實驗明確EZH2對腎癌細胞生物學(xué)作用的影響,同時通過尋找EZH2下游的靶基因以明確其具體的調(diào)控機制。
　　方法:
　　通過免疫組化學(xué)法、實時定量PCR法和免疫印跡法分別檢測臨床腎癌標本中EZH2在蛋白水平和mRNA水平的表達情況及與腎癌臨床病理間的關(guān)系。運用RN

4、A干擾技術(shù)沉默EZH2后,先以qRT-PCR和Western Blot法在mRNA水平和蛋白水平驗證EZH2下調(diào)情況,再通過MTT實驗、流式細胞術(shù)檢測EZH2下調(diào)后對腎癌細胞增殖、凋亡的影響。并通過qRT-PCR法檢測EZH2下游分子RUNX3的表達情況。
　　結(jié)果:
　　EZH2和RUNX3蛋白在腎癌組織中的陽性表達率分別為67.9％和37.5%,在癌旁正常腎組織的陽性表達率分別為28.6%和67.3%;EZH2和RUNX

5、3在腎癌組織和癌旁正常組織中的表達差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),腎細胞癌中EZH2的高表達和RUNX3的低表達均與臨床分期相關(guān)(P<0.05),與病理分化程度、性別、年齡等的關(guān)系無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。Spearman相關(guān)分析顯示二者在腎癌中的表達呈明顯的負相關(guān)關(guān)系。EZH2表達下調(diào)后,腎癌細胞的增殖明顯受抑制,凋亡細胞明顯增多,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,同時下游分子RUNX3的表達與EZH2呈負相關(guān)。
　　結(jié)論: