CD45分子在重癥肌無力患者胸腺的表達及其對T細胞分化的影響.pdf

1、背景與目的:
　　重癥肌無力(myasthenia gravis,MG)是由乙酰膽堿受體(acetylcholinereceptor,AChR)抗體介導的、神經肌肉傳遞障礙為表現的一種器官特異性自身免疫病。MG的發(fā)病與遺傳因素、機體免疫功能異常及免疫調節(jié)功能紊亂等多種因素有關,對重癥肌無力的相關研究顯示,該病的發(fā)生和胸腺的關系十分密切,80％-90％的MG患者胸腺有胸腺增生或胸腺瘤等異常病變。胸腺作為中樞免疫器官是T淋巴細胞發(fā)育、

2、分化、成熟的場所,T細胞在胸腺經歷一系列膜分子的表達及陽性選擇和陰性選擇過程,獲得功能性TCR的表達、MHC限制性和自身耐受性,發(fā)育成熟進入外周血液循環(huán),并定居于脾臟、淋巴結等外周免疫器官。胸腺結構和功能異常,將影響T細胞在胸腺的分化發(fā)育和成熟。由于陰性選擇是清除自身反應性T細胞、形成自身免疫耐受的關鍵環(huán)節(jié),因此,陰性選擇障礙是導致自身免疫性疾病發(fā)生的原因之一。
　　近年來有關研究發(fā)現,MG的發(fā)病過程常常與T細胞異常有關,T細胞介

3、導的細胞免疫功能紊亂是MG發(fā)病的一個重要原因。CD45是一種單鏈跨膜糖蛋白,包括CD45RA、CD45RB、CD45RC、CD45RO等多種異構體,因其胞質區(qū)具有酪氨酸磷酸酶(protein-tyrosine phosphatase,PTP)活性,在調節(jié)信號轉導和TCR、BCR介導的細胞活化中有重要作用。多種細胞(如T細胞、B細胞、NK細胞等)均可表達CD45分子,其中T細胞表面的CD45分子的表達對其發(fā)育、分化及功能的發(fā)揮影響較大,C

4、D45RA和CD45RO與T細胞的功能狀態(tài)及T細胞在胸腺的分化過程密切相關。
　　本研究采用免疫組化法檢測CD45RA、CD45RO分子在MG增生型胸腺組織中的表達,并用流式細胞術檢測MG患者胸腺細胞表面CD45RA、CD45RO、以及CD4和CD8分子的表達水平,通過RT-PCR和Real time PCR技術從基因水平上檢測了CD45、CD69、Bcl-2及CD28分子的表達,旨在探索MG增生型胸腺組織中T細胞亞群的發(fā)育和CD

5、45分子在疾病中的作用,為深入研究MG的發(fā)病機制提供依據。
　　方法:
　　1.采用免疫組化法檢測15例MG患者增生型胸腺和10例正常對照者胸腺組織CD45RA、CD45RO分子的分布及表達。
　　2.采用流式細胞術檢測法分析15例MG患者增生型胸腺和10例正常對照者胸腺細胞CD4、CD8、CD45RA、CD45RO的表達。
　　3.采用RT-PCR法、Real time PCR法定量分析7例MG患者和7例正常對

6、照胸腺組織中CD45、CD69、Bcl-2及CD28分子mRNA的表達。
　　結果:
　　1.免疫組化顯示,MG組和正常對照組胸腺組織中CD45RA均呈弱陽性表達,二者無明顯差異(p>0.05),而CD45RO在MG組呈強陽性表達且為灶狀分布,與對照組相比有明顯差異(p<0.05)。
　　2.流式細胞術檢測結果顯示,MG患者胸腺組織中CD45RA分子表達顯著低于對照組(p<0.01),而CD45RO分子表達顯著高于對照

7、組(p<0.01)。MG患者胸腺雙陰性細胞(CD4-CD8-)與對照組相比無統(tǒng)計學差異(p>0.05),雙陽性細胞(CD4+CD8+)顯著性高于正常對照組(p<0.05),而單陽性細胞(CD4+CD8-和CD4-CD8+)在MG組均顯著性低于對照組(p<0.05)。
　　3.MG組和正常對照組胸腺組織均有CD45、CD69、bcl-2及CD28 mRNA的表達,通過熒光定量PCR進一步定量分析發(fā)現,MG患者胸腺組織中CD45、CD

8、69、bcl-2和CD28 mRNA的表達與對照組相比分別上調了2.55、2.03、2.21和2.08倍(2-△△Ct>2)。
　　結論:
　　1.MG增生型胸腺組織中CD45RO亞型表達顯著異常,可能是胸腺增生型MG發(fā)病機制的一個重要因素,與MG患者胸腺組織T細胞分化發(fā)育異常有關;
　　2.MG胸腺細胞存在異?；罨?CD45 mRNA的高表達可能對TCR信號途徑下游通路進行了調控,介導了CD69的表達,對于細胞功能的