重癥肌無力患者胸腺組織中AGA和SNX17基因mRNA的表達(dá).pdf

1、背景及目的 重癥肌無力(myasthenia gravis，MG)主要是由乙酰膽堿受體抗體(acetylcho-line receptor antibody,AchRAb)介導(dǎo)的，針對神經(jīng)肌肉接頭處突觸后膜上乙酰膽堿受體(acetylcholine receptor,AchR)的自身免疫性疾病(AID)。多年來，人們對MG發(fā)病機制進(jìn)行了大量研究，充分肯定了免疫機制在MG發(fā)病過程中的重要作用。同時，我們在臨床研究中還發(fā)現(xiàn)了MG家族

2、和先天性肌無力綜合征等病例，證明MG的發(fā)病受遺傳因素影響，具有明顯的遺傳傾向性，并且它們與HLA表型、AchRα亞單位基因、免疫球蛋白重鏈基因和T細(xì)胞受體基因有關(guān)。MG患者常伴隨胸腺的改變，約80﹪-90﹪的病人有胸腺異常。許多研究證明，胸腺與MG的發(fā)病關(guān)系密切，并且胸腺切除可以使MG患者臨床癥狀得以有效的改善。近年來，我們MG研究小組利用MG患者手術(shù)切除的胸腺組織，通過基因芯片技術(shù)和差示文庫技術(shù)篩選出了25個MG的相關(guān)基因，其中天冬氨

3、酰氨基葡糖苷酶(aspartyl-glucosaminidase，AGA)和分揀微管連接蛋白17(sorting nexins17，SNX17)基因在MG患者的胸腺組織中高表達(dá)異常。但是，目前國內(nèi)外尚無AGA和SNX17兩基因與MG關(guān)系的相關(guān)報道。 AGA是一種分解N-連接寡糖糖蛋白的關(guān)鍵酶。它從殘留的N-乙酰葡萄糖胺中分離天(門)冬酰胺，這是溶酶體分解糖蛋白最后步驟之一。Moms等人通過原位雜交技術(shù)將AGA基因定位在4q32

4、-q33。SNXl7構(gòu)成了親水分子的一個大的保守家族，這些親水分子和許多類型的受體作用。國際放射雜交圖譜委員會(IRHMC)將SNX17基因定位在2號染色體(2p23-p22)。SNX17被鑒定作為和低密度脂蛋白受體(low density lipoprotein receptor,LDLR)家族成員相互作用的合體。它位于早期內(nèi)涵體小室的特殊部位，可以提高LDLR和其它可能的表面受體的內(nèi)吞率。利用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)方法

5、定量分析AGA和SNX17基因在MG患者胸腺與正常胸腺組織中的mRNA表達(dá)水平，推測兩基因與MG發(fā)病的相關(guān)性。探討兩基因與MG發(fā)病機制的關(guān)系，從而對今后MG的病因研究及進(jìn)一步的生物治療奠定基礎(chǔ)。 材料與方法 首先提取并鑒定構(gòu)建的重組質(zhì)粒pGEM-T-β-actin，稀釋后行FQ-PCR擴增，確定標(biāo)準(zhǔn)曲線。從臨床上39例MG患者和10例先天性心臟病患者切除的胸腺組織中提取總RNA，在禽成髓細(xì)胞瘤病毒(AMV)催化下特異逆

6、轉(zhuǎn)錄合成cDNA，通過FQ-PCR擴增β-actin以及AGA和SNX17基因，測定β-actin基因與AGA和SNX17基因的Ct值，分別以每例標(biāo)本AGA基因與β-actin基因、SNX17基因與β-actin基因Ct值之比，作為該例標(biāo)本目的基因mRNA的相對表達(dá)量。比較AGA和SNX17兩基因在MG患者和正常人胸腺組織，以及不同性別和不同臨床分型MG患者之間AGA和SNX17基因mRNA的表達(dá)情況。 使用SPSS 10.0軟

7、件包中成組設(shè)計兩樣本t檢驗檢測MG患者和正常人胸腺組織中．AGA和SNX17基因mRNA的表達(dá)結(jié)果，以及不同性別MG患者胸腺組織中AGA和SNX17基因mRNA的表達(dá)結(jié)果，方差分析檢驗檢測MG患者中不同臨床分型的AGA和SNXl7基因mRNA的表達(dá)結(jié)果，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。 結(jié)果 (1)AGA基因在MG患者和正常人胸腺組織中的mRNA表達(dá)水平分別為0．67±0．14和0．61±0.08，兩者之間的差異有明顯的統(tǒng)計學(xué)意

8、義P＜0.05)。在不同臨床分型的MG患者之間胸腺組織中的mRNA表達(dá)水平分別為0．664±0．14，0．634±0．13，0．704±0.09和0．71±0．16，它們之間的差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 (2)SNX17基因在MG患者和正常人胸腺組織中的mRNA表達(dá)水平分別為O．70±0．11和0．624±0．13，兩者之間的差異有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。在不同臨床分型的．MG患者之間胸腺組織中的mRNA表

9、達(dá)水平分別為0．674±0．16，0.69±0.06，0.71±0.08和0.75+0.18，它們之間的差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 (3)AGA基因在不同性別MG患者胸腺組織中的mRNA表達(dá)水平分別為0.64±0.15和0.694±0.13，它們之間的差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。SNX17基因在不同性別MG患者胸腺組織中的mRNA表達(dá)水平分別為0.67±0.21和0.71±0.11，它們之間的差異無明顯統(tǒng)