骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植結(jié)合堿性成纖維細(xì)胞生長因子-肝素緩釋支架在豬心肌血運(yùn)重建中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stemcells，MSCs)存在于成人體內(nèi)多種組織，可利用貼壁培養(yǎng)法將其分離出來。間充質(zhì)干細(xì)胞有很強(qiáng)的克隆形成和擴(kuò)增能力，并且具有向成骨，脂肪，軟骨，神經(jīng)和內(nèi)皮等多種組織細(xì)胞分化的潛能。故已應(yīng)用于包括急性心梗，自身免疫病，神經(jīng)系統(tǒng)損傷在內(nèi)的很多疾病的臨床治療。人骨髓來源的Flk1+CD34-CD31-的間充質(zhì)干細(xì)胞亞群具有血液血管干細(xì)胞特性，其在體外通過VEGF等誘導(dǎo)，能夠形成典型的血管樣結(jié)構(gòu)。是

2、治療心血管疾病的良好種子細(xì)胞。
　　 早期的研究表明：對不適合外科手術(shù)及傳統(tǒng)方法治療的終末期冠心病患者，激光打孔心肌血運(yùn)重建術(shù)起到了一定的治療作用，但其固有的熱損傷效應(yīng)等缺陷大大限制了它的應(yīng)用。我們前期的研究證明：心梗區(qū)進(jìn)行大孔徑的機(jī)械性鉆孔同時(shí)在孔道內(nèi)置入復(fù)合bFGF的肝素支架會帶來顯著的促血管生成效應(yīng)從而刺激孔道周圍新生血管網(wǎng)的形成并且對心臟組織無熱損傷。
　　 本課題通過骨穿獲得小型豬的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs

3、)，并對其進(jìn)行形態(tài)及功能分析，將以上尚不完善的各種方法聯(lián)合使用，互相促進(jìn)，旨在尋找一種有效的治療缺血性心臟病的方法，并探討干細(xì)胞在其中的作用機(jī)制，為更有效的進(jìn)行干細(xì)胞移植治療進(jìn)行摸索。
　　 本文第一部分：旨在證明中華實(shí)驗(yàn)用小型豬的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)性狀及多向分化潛能，尤其是分化為心血管組織的能力。利用密度梯度離心法分離并培養(yǎng)BMSCs，用VEGF誘導(dǎo)其向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化。免疫熒光法檢測BMSCs的體外分化。結(jié)果顯示，在體

4、外經(jīng)誘導(dǎo)的BMSCs表達(dá)CD31抗原。以上結(jié)果說明該BMSCs可分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞，是心血管再生醫(yī)學(xué)的理想種子細(xì)胞。
　　 第二部分：利用高分子聚合材料聚己內(nèi)酯PCL、聚乳酸/乙醇酸(PLGA)制作符合心肌收縮功能的緩釋藥物支架并對支架的各種性能進(jìn)行體外檢測發(fā)現(xiàn)：該支架能夠承受心肌的收縮壓力，具有良好的組織相容性，藥物釋放符合治療要求。
　　 第三部分：研究豬的異體BMSCs經(jīng)心肌內(nèi)注射聯(lián)合TMDR及含bFGF的肝素化緩

5、釋支架治療急性心肌梗塞(AMI)的有效性和移植細(xì)胞的作用機(jī)制。利用結(jié)扎阻斷法制成AMI模型。在此基礎(chǔ)上設(shè)立對照組(T)、打孔后細(xì)胞移植組(TC)、打孔后支架置入組(TS)和聯(lián)合治療組(TSC)。操作時(shí)于心梗區(qū)行3.0mm機(jī)械式透壁性鉆孔后立即置入等孔徑bFGF的肝素化緩釋支架，在支架周圍經(jīng)心肌注入標(biāo)記的BMSCs。6周后取組織切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析新生血管形成情況、核素心肌斷層顯像檢測相對心肌缺血質(zhì)量、心臟超聲學(xué)評價(jià)心臟功能的變化。免

6、疫熒光法分析細(xì)胞的植入和分化。結(jié)果顯示，術(shù)后6周，與T組相比，TC組、TS組及TSC組新生血管密度及心肌局部血流灌注均顯著增加(P＜0.001)，心功能改善符合這一趨勢。聯(lián)合治療組中上述指標(biāo)與TS或TC組相比亦存在顯著差異(P＜0.05)。免疫熒光結(jié)果顯示，標(biāo)記的BMSCs廣泛分布在心肌梗死區(qū)及心梗周邊區(qū)，甚至分布在梗死中心區(qū)。移植細(xì)胞表達(dá)陽性的vWF抗原。因此，聯(lián)合治療更有利于心梗后心功能、血流灌注的改善及移植細(xì)胞的存活，存活細(xì)胞在體