煙酰胺聯合堿性成纖維細胞生長因子體內誘導骨髓干細胞治療大鼠糖尿病的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 當今，糖尿病已成為患病人數眾多并極具破壞性的疾病。目前主要是以口服抗高糖藥物及胰島素治療為主。而干細胞治療糖尿病已經進入人們的視野，諸多的研究已表明，干細胞治療糖尿病，尤其是1型糖尿病，已取得初步成果，成為有希望治愈糖尿病的療法。其中骨髓干細胞(Bone marrow stem cells，BMSCs)因其具有較強的可塑性并易于獲得，所以應用前景廣闊。目前已有關于BMSCs在體外向胰島素分泌細胞(Insulin-p

2、roducing cells，IPCs)分化的報道。但在體外條件下誘導分化干細胞存在易污染及致瘤性等問題，因此，本研究探討煙酰胺(Nicotinamide，N)和堿性成纖維細胞生長因子(Basic fibroblast growth factor，bFGF)在STZ致糖尿病大鼠體內能否誘導BMSCs分化為IPCs，從而對糖尿病大鼠起到治療作用。
　　 材料和方法:
　　 一、實驗動物分組及處理
　　 40只雄性S

3、D大鼠按隨機數字表隨機分為兩組：健康對照組(10只)和造模組（30只）。造模組大鼠一次性腹腔注射2％鏈脲佐菌素(STZ)55mg/kg，建立STZ糖尿病大鼠模型，隨機分為糖尿病未治療組、單純動員組和動員并誘導組，每組10只。其中單純動員組和動員并誘導組分別皮下注射10μg/kg.d重組人粒細胞集落刺激因子（thG-CSF，商品名特爾津），連續(xù)15天，健康對照組和糖尿病未治療組給予相當劑量的生理鹽水皮下注射。動員并誘導組自注射thG-CS

4、F第2天起給予煙酰胺800mg/kg.d灌胃及堿性成纖維細胞生長因子1050U/只d腹腔注射，連續(xù)14天，健康對照組、糖尿病未治療組和單純動員組給予同等劑量的生理鹽水灌胃及腹腔注射。
　　 二、生化指標的檢測及方法
　　 整個實驗中，各組大鼠每周測一次體重及血糖。治療前和實驗終止時各取血測血清胰島素一次(ELISA法)，實驗終止時10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉，取胰腺、肝臟和脾臟，用免疫組織化學染色(SABC法)

5、檢測其中胰島素染色陽性細胞表達。圖像采集分析系統對各組大鼠胰腺組織中胰島素染色陽性細胞面積占胰島面積百分比進行分析。
　　 結果:
　　 一、生化檢測結果
　　 治療前，糖尿病未治療組、單純動員組及動員并誘導組大鼠血糖、血清胰島素無顯著性差異。治療2周時，動員并誘導組大鼠血糖低于糖尿病未治療組及單純動員組(P＜0.05)，但仍高于健康對照組(P＜0.05)；治療4周時，動員并誘導組血糖低于糖尿病未治療組及單純動員

6、組，但高于健康對照組(P＜0.05)；單純動員組大鼠的血糖、血清胰島素與糖尿病未治療組無顯著性差異(P＞0.05)，動員并誘導組血清胰島素水平高于糖尿病未治療組及單純動員組(P＜0.05)，但低于健康對照組(P＜0.05)。治療2周時，糖尿病未治療組大鼠體重低于健康對照組(P＜0.05)但與單純動員組及動員并誘導組大鼠相比無顯著差異(P＞0.05)，治療4周時糖尿病未治療組、單純動員組大鼠體重低于健康對照組(P＜0.05)而動員并誘導組

7、與健康對照組、糖尿病未治療組及單純動員組大鼠體重并無明顯差異(P＞0.05)。
　　 二、免疫組織化學及圖像分析結果
　　 實驗終止時免疫組織化學檢測胰腺中胰島素陽性細胞百分比發(fā)現健康對照組明顯高于其他各組(P＜0.01)，動員并誘導組低于健康對照組但是明顯高于糖尿病未治療組(P＜0.01)及單純動員組(P＜0.01)，而糖尿病未治療組及單純動員組間無顯著性差異(P＞0.05)。在動員并誘導組的肝臟和脾臟中發(fā)現胰島素染色