大蒜多倍體化學(xué)誘導(dǎo)技術(shù)研究.pdf

1、本文研究了建立大蒜(Allium staivum L．)化學(xué)誘導(dǎo)多倍體產(chǎn)生的兩條途徑，采用添加化學(xué)誘導(dǎo)劑于培養(yǎng)基上的離體愈傷誘導(dǎo)方法和蒜瓣莖尖注射化學(xué)誘導(dǎo)劑的活體注射方法，并篩選出合適的誘導(dǎo)途徑、化學(xué)誘導(dǎo)劑和誘導(dǎo)劑濃度。 (1)以G064品種的莖盤為外植體，在MS+2，4-D2.0+6-BA1.0上獲得愈傷組織，在MS+NAA2.0+BA1.0培養(yǎng)基繼代培養(yǎng)，通過愈傷組織在分化培養(yǎng)基上分化出不定芽。愈傷組織在繼代培養(yǎng)過程中易發(fā)生

2、變異，隨著繼代次數(shù)的增加分化能力下降，繼代1～2次的愈傷組織分化能力最強(qiáng)。MS+6-BA3.0+IAA0.1是愈傷組織分化不定芽的最適培養(yǎng)基，平均每塊愈傷組織分化3.6個(gè)不定芽。 (2)將愈傷組織置于分別添加3個(gè)不同濃度的秋水仙素、二甲戊靈、氟樂靈溶液的固體培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)多倍體發(fā)生。變異的誘導(dǎo)主要受誘導(dǎo)劑濃度和處理時(shí)問的影響。0.1％秋水仙素處理5d時(shí)，愈傷組織的存活率達(dá)到80.7％，分化率78.1％，四倍體的誘導(dǎo)率為4％。10

3、0μmol/L二甲戊靈處理5d愈傷組織的存活率達(dá)100％，是秋水仙素十分理想的替代品，四倍體的誘導(dǎo)率為3.1％。而氟樂靈具有強(qiáng)揮發(fā)性，對(duì)愈傷組織的傷害比較大，愈傷組織在高濃度短時(shí)間內(nèi)存活率較高，但分化率只有53.7％，100μmol/L處理5d時(shí)僅獲得四倍體苗1棵。 (3)采用不同濃度的秋水仙素、二甲戊靈、氟樂靈溶液分別注射處理G064、G025、G091蒜瓣生長(zhǎng)點(diǎn)，使大蒜葉片的下表皮氣孔長(zhǎng)度、寬度、面積和周長(zhǎng)極顯著增大，且氣孔

4、密度減??；通過對(duì)根尖染色體的觀察，根尖染色體數(shù)目加倍，顯示大蒜蒜瓣莖尖染色體被有效加倍。濃度為0.1％的秋水仙素溶液對(duì)G064和G091葉下表皮氣孔的誘導(dǎo)效果最佳，處理G025大蒜莖尖最佳秋水仙素濃度則為0.05％；二甲戊靈100μmol/L對(duì)三種基因型大蒜莖尖的處理效果都比較理想;氟樂靈對(duì)三種基因型大蒜作用各有不同，短時(shí)間200μmol/L的處理濃度對(duì)G064有利，而G025在50μmol/L的誘導(dǎo)下葉片下表皮氣孔大小與對(duì)照差異顯著，

5、G091由于其本身的受創(chuàng)易腐爛的特性，氟樂靈處理后氣孔變異較小，但高濃度短時(shí)間和低濃度長(zhǎng)時(shí)間處理效果比較好。 分別觀察大蒜3片葉的下表皮氣孔發(fā)現(xiàn)，隨著葉片的不斷生長(zhǎng)，誘導(dǎo)劑的處理效果呈下降趨勢(shì)，對(duì)第一片葉的誘導(dǎo)效果最佳。蒜瓣莖尖注射誘導(dǎo)劑3d，在第三片葉發(fā)出前剝?nèi)∏o尖接種誘導(dǎo)加倍植株，獲得多倍體大蒜。 (4)莖尖作為大蒜生長(zhǎng)點(diǎn)，是分化能力最強(qiáng)的理想外植體。以蔗糖為糖源的MS+GA100+6-BA3.0+NAA0.1是誘導(dǎo)