右美托咪定抑制膠質細胞炎性反應的機制研究.pdf

1、研究背景和目的:小膠質細胞和星型膠質細胞在中樞神經系統(tǒng)的免疫調節(jié)中發(fā)揮重要作用，目前研究認為小膠質細胞和星型膠質細胞是中樞炎性細胞因子的重要來源，在中樞慢性疾病及神經退行性疾病中發(fā)揮重要作用。右美托咪定作為一種高選擇性α2腎上腺能受體激動劑，可降低老年患者術后譫妄和認知功能障礙的發(fā)生率，動物實驗亦發(fā)現(xiàn)右美托咪定可減少認知功能損害，這可能與其抑制中樞炎癥相關。細胞學實驗顯示，右美托咪定能夠明顯抑制小膠質細胞炎癥因子的釋放，而膠質細胞是中樞

2、炎性因子的主要來源，因此研究右美托咪定調控炎性因子的具體機制將有助于揭示術后譫妄及認知功能損害的發(fā)生機制并為藥物防治提供新思路。本研究擬采用脂多糖(LPS)刺激小膠質細胞和星型膠質細胞產生炎癥反應，并用右美托咪定預處理觀察炎癥指標，同時檢測相關蛋白表達的變化，探討其調節(jié)中樞炎癥的可能機制。
　　材料與方法:原代星型膠質細胞和小膠質細胞（BV2小膠質細胞系和原代小膠質細胞）分離培養(yǎng)，不同濃度的右美托咪定（0.01，0.1，1和10μ

3、mol/L）預處理，同時給予ERK、JNK或p38特異性的抑制劑，然后培養(yǎng)液中加入LPS刺激，比色法測定細胞活力，硝酸酶還原法檢測培養(yǎng)液中NO的含量，實時定量PCR法檢測iNOS，IL-6、TNF-α mRNA的表達量，同時利用western blot檢測培養(yǎng)細胞內的ERK、JNK和p38表達的變化。
　　結果:原代星型膠質細胞暴露于不同濃度的右美托咪定（0.01，0.1，1和10μmol/L）或LPS(1μg/ml)24h。用比

4、色法測定細胞活力，結果顯示，右美托咪定(0.01，0.1，1和10μmol/L)和LPS(1μg/ml)對星型膠質細胞的活性沒有影響(P＞0.05);原代星型膠質細胞用不同濃度的右美托咪定提前30分鐘處理后，再給予LPS刺激，結果顯示，右美托咪定(≥0.1μmol/L)能夠明顯抑制原代星型膠質細胞TNF-α和IL-6的表達，且呈現(xiàn)出濃度相關性(P＜0.01);當右美托咪定的終濃度小于0.1μmol/L時，未能顯著抑制TNF-α和IL-6

5、的表達(P＞0.05);1μg/ml的LPS可引起p-JNK和p-p38的顯著升高(P＜0.01)，右美托咪定(≥0.1μmo l/L)預處理后可顯著降低p-JNK的表達(P＜0.01); JNK的特異性抑制劑SP600125可與右美托咪定協(xié)同抑制星型膠質細胞TNF-o和IL-6表達(P＜0.01)。
　　小膠質細胞暴露于不同濃度的右美托咪定（0.01，0.1，1，10和100μmol/L）和LPS（0.1，1，和10μ g/ml

6、）對小膠質細胞無明顯毒性(P＞0.05)，而100μmol/L的右美托咪定則對原代培養(yǎng)的小膠質細胞的活性有顯著影響(P＜0.01);當右美托咪定劑量≥0.1μmol/L時，可降低LPS導致的小膠質細胞NO產生和iNOS表達(P＜0.01)，而劑量為0.01μmol/L時，右美托咪定預處理未顯示出相應的抑制作用(P＞0.05);對于MAPKs通路的作用，右美托咪定在≥0.1μmol/L時可明顯降低p-ERK的表達(P＜0.01)，隨著右美

7、托咪定劑量的增加其抑制效果沒有增加(P＞0.05)，同時右美托咪定對于總的ERK水平沒有影響(P＞0.05);ERK的特異性抑制劑PD98059可與右美托咪定協(xié)同抑制小膠質細胞iNOS的表達和NO的產生(P＜0.01)。
　　結論:右美托咪定（≥0.1μmol/L）可顯著抑制星型膠質細胞TNF-α和IL-6的表達量，JNK信號途徑參與右美托咪定對于星型膠質細胞的炎性反應抑制作用;右美托咪定（≥0.1μ mol/L）可顯著抑制小膠質