右美托咪定對缺氧-復氧損傷A549細胞的干預及機制.pdf

1、目的：觀察右美托咪定(dexmedetomidine, DEX)對缺氧/復氧（ hypoxia/reoxygenation，H/R）損傷A549細胞的干預作用及機制。
　　方法：培養(yǎng)A549細胞，將長至對數(shù)生長期的細胞隨機分成4組（n=10）：常氧組（N組），DEX組（D組），H/R損傷組（H組），H/R損傷+DEX干預組（HD組）。造模前先將4組細胞的完全培養(yǎng)基更換成無血清的F12K培養(yǎng)基，在常氧培養(yǎng)箱中預處理1個小時。N組：A

2、549細胞在常氧培養(yǎng)箱中用無血清F12K培養(yǎng)液培養(yǎng)30h。D組：A549細胞用含DEX（1nM）的無血清F12K培養(yǎng)液在常氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30h。H組：A549細胞用OGD液在缺氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6h，再用無血清F12K培養(yǎng)液在常氧培養(yǎng)箱中復氧24h。HD組：A549細胞缺氧處理6h，復氧24h， DEX（1nM）在缺氧開始時加入培養(yǎng)液。造模結(jié)束后， A549細胞在倒置顯微鏡下進行形態(tài)學改變的觀察。A549細胞活力檢測采用CCK-8法。A54

3、9細胞凋亡指數(shù)（AI）檢測采用原位末端標記（TUNEL）法。蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測細胞內(nèi)GRP78、CHOP、p-JNK、caspase-12、caspase-3蛋白的表達水平。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（ RT-PCR）檢測GRP78、CHOP、JNK、caspase-12 mRNA的表達水平。各組caspase-3酶的活性檢測采用caspase-3活性檢測試劑盒。
　　結(jié)果：⑴在N組和D組中，大量細胞呈梭型，

4、貼壁生長。胞體明亮，細胞核完整，未見懸浮細胞。H組中貼壁細胞間間隙增大，數(shù)量減少顯著。細胞形態(tài)出現(xiàn)變化，細胞長出分支，呈多邊型。有些細胞發(fā)生融合現(xiàn)象，細胞核固縮，胞體變暗。大量細胞碎片及死細胞漂浮在上清液中。與H組相比較，HD組貼壁細胞數(shù)相對較多，上清液中細胞碎片及死細胞數(shù)量減少。⑵與N組比較，H組A549細胞的OD值明顯下降（P＜0.01）。HD組與H組相比，OD值上調(diào)，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。⑶與N組比較， H組A549細

5、胞AI值升高（ P＜0.01），凋亡細胞數(shù)明顯增加。HD組與H組相比，AI值降低明顯，凋亡細胞數(shù)相對減少，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。⑷與N組相比，D組GRP78、CHOP、caspase-12、p-JNK和caspase-3蛋白水平無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)；H組中 GRP78、CHOP、caspase-12、p-JNK和caspase-3蛋白表達均明顯升高(P＜0.01)。HD組與H組相比， CHOP、caspase-12、

6、p-JNK和caspase-3蛋白表達顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。⑸與N組相比，D組GRP78、CHOP、caspase-12和JNK mRNA水平無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)；H組中GRP78、CHOP、caspase-12和JNK mRNA表達均明顯升高(P＜0.01)。HD組與H組相比，GRP78 mRNA表達上升(P＜0.01), CHOP、caspase-12、JNK mRNA表達顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義(P