紫杉醇長(zhǎng)效緩釋注射微球的研究.pdf

1、紫杉醇是一種從太平洋紅豆杉樹樹皮中提取的有效抗腫瘤藥。臨床研究已經(jīng)證實(shí)了紫杉醇在抗多種實(shí)體腫瘤，包括乳腺癌、晚期卵巢癌、肺癌、腦部和頸部腫瘤以及急性白血病方面，都有重要而顯著的作用。近年來(lái)也有報(bào)道認(rèn)為，紫杉醇對(duì)于非激素依賴的前列腺癌也有良好的療效。由于紫杉醇在水中以及許多藥用溶劑中的低溶解性，目前市售紫杉醇注射劑均是以聚氧乙烯蓖麻油(CremophorEL)為溶劑，該溶劑副作用大，易引起嚴(yán)重的過敏反應(yīng)。同時(shí)，紫杉醇作為一種細(xì)胞周期特異性

2、的藥物，體內(nèi)低劑量持續(xù)給藥較一次性沖擊給藥的抑瘤效果更理想。因此，為了解決以上問題，許多研究者將紫杉醇制備成不同緩釋劑型，如脂質(zhì)體、微乳、微球、納米粒等。這些劑型不但可以有效避免Cremophor EL的毒性，降低紫杉醇的自身毒性，還可以延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的作用時(shí)間。目前，在眾多紫杉醇微球的研究中，對(duì)于紫杉醇微球皮下給藥并進(jìn)行系統(tǒng)研究的文獻(xiàn)未見報(bào)道，因此本研究擬對(duì)紫杉醇長(zhǎng)效緩釋注射微球的處方工藝，以及皮下給藥的藥效學(xué)、藥動(dòng)學(xué)進(jìn)行系統(tǒng)的研究和

3、評(píng)價(jià)。 微球制劑作為能夠緩釋藥物的劑型已經(jīng)被廣泛研究。這種劑型通過其特殊骨架材料——PLGA的降解溶蝕達(dá)到緩釋藥物的目的。同時(shí)由于該骨架材料可生物降解為水和CO<,2>，對(duì)人體無(wú)毒無(wú)害，已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)為藥用輔料。因此將具有良好抗瘤活性的紫杉醇制備成長(zhǎng)效緩釋注射微球用于腫瘤治療，可以有效降低藥物毒性、延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間，同時(shí)具有顯效快、作用強(qiáng)、給藥方便等特點(diǎn)。本論文以不同分子量和不同乳酸/羥基乙酸(LA/GA)比例的PLGA作為載

4、體，研究制備了紫杉醇長(zhǎng)效緩釋注射微球。研究?jī)?nèi)容主要包括紫杉醇微球的處方和制備工藝研究、體外釋藥方法的研究、制劑穩(wěn)定性研究、微球的體外釋藥機(jī)理研究、體內(nèi)藥效學(xué)評(píng)價(jià)、體內(nèi)過程研究以及血液毒性和生物相容性的研究。 1、紫杉醇長(zhǎng)效緩釋注射微球的處方設(shè)計(jì)和工藝研究 采用改良的單乳溶劑蒸發(fā)法制備了紫杉醇微球。以微球形態(tài)、粒徑及其分布、微球載藥量以及包封率、體外釋藥曲線等作為微球的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過單因素考察(包括PLGA分子量、PL

5、GA的濃度、LA/GA不同比例、攪拌速度等)和正交實(shí)驗(yàn)，對(duì)處方和工藝進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明所制得的微球表面光滑圓整，粒徑均勻，平均粒徑小于5μm，包封率大于80％，體外可持續(xù)釋藥20～30d。 2、紫杉醇長(zhǎng)效緩釋注射微球體外釋藥評(píng)價(jià)方法的建立與制劑穩(wěn)定性研究 本章主要對(duì)紫杉醇微球的體外釋藥條件進(jìn)行了考察，包括不同的釋放介質(zhì)、不同釋放容器、抑菌劑的影響等。同時(shí)建立了加速釋藥方法以縮短評(píng)價(jià)周期，對(duì)長(zhǎng)期試驗(yàn)和短期試驗(yàn)的釋放度數(shù)據(jù)進(jìn)

6、行點(diǎn)點(diǎn)對(duì)應(yīng)的相關(guān)性擬合，結(jié)果表明二者相關(guān)性較好，可用體外短期加速釋放實(shí)驗(yàn)預(yù)測(cè)長(zhǎng)期釋藥的釋放度數(shù)據(jù)。 通過對(duì)紫杉醇微球的外觀形態(tài)、藥物含量、體外釋放行為的考察，表明制備的紫杉醇長(zhǎng)效緩釋注射微球在高溫、高濕及光照條件下各方面性質(zhì)均不穩(wěn)定，保存時(shí)應(yīng)注意避光、低溫、干燥。<'60>Co輻射滅菌對(duì)于該微球制劑無(wú)明顯影響。 3、紫杉醇長(zhǎng)效緩釋注射微球釋藥機(jī)理的研究 通過失重法和對(duì)聚合物分子量的GPC檢測(cè)，評(píng)價(jià)了PLGA微球的

7、體外降解行為。結(jié)果顯示聚合物在體外釋放30天的時(shí)間里，分子量的分布范圍雖然增大，但變化不明顯。說(shuō)明紫杉醇緩釋微球的釋藥過程并非主要依靠聚合物的降解。通過測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)微球在釋放介質(zhì)中的粒徑變化評(píng)價(jià)微球的溶脹程度。采用Higuchi、零級(jí)、一級(jí)方程和Ritger-Peppas指數(shù)模型對(duì)釋藥曲線進(jìn)行擬合，結(jié)果表明紫杉醇長(zhǎng)效緩釋注射微球的釋藥曲線符合Higuchi方程。方程擬合結(jié)果與GPC結(jié)果皆說(shuō)明在微球釋藥過程中，藥物的自身擴(kuò)散起到了較為重

8、要的作用。 4、紫杉醇長(zhǎng)效緩釋注射微球體內(nèi)藥效學(xué)研究 本章以MTT法評(píng)價(jià)了紫杉醇長(zhǎng)效緩釋注射微球?qū)DA-MB-435乳腺癌細(xì)胞的體外抑瘤活性；以小鼠體內(nèi)S-180腫瘤和裸鼠體內(nèi)的PC-3m腫瘤為研究對(duì)象，分別探討了紫杉醇微球?qū)υ隗w腫瘤的抑制效果。結(jié)果表明紫杉醇微球的體外抑瘤活性高于紫杉醇注射液，同時(shí)呈現(xiàn)劑量依賴性；在瘤旁皮下給藥對(duì)S-180腫瘤的抑瘤效果最佳，相同給藥劑量時(shí)微球組對(duì)腫瘤的抑制率高于紫杉醇注射液，而微球?qū)?/p>

9、腫瘤的抑制效果也具有劑量依賴的特性；對(duì)于裸鼠體內(nèi)PC-3m腫瘤，紫杉醇微球也表現(xiàn)了良好的抑瘤活性，尤其在相同給藥劑量和給藥途徑的情況下，微球組的腫瘤生長(zhǎng)曲線最為緩慢，抑瘤率也最高。 5、紫杉醇長(zhǎng)效緩釋注射微球注射劑體內(nèi)過程的研究與評(píng)價(jià) 以大鼠作為模型動(dòng)物，對(duì)紫杉醇長(zhǎng)效緩釋注射微球的體內(nèi)過程進(jìn)行了初步研究。大鼠皮下注射微球后的藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果表明，紫杉醇微球在給藥后的28d內(nèi)緩慢釋放藥物，Cmax為68.63ng/ml，Tm

10、ax為3.28d，MRT為17.32d，藥代動(dòng)力學(xué)過程符合二室模型一級(jí)吸收，其絕對(duì)生物利用度達(dá)到97.85％。體內(nèi)殘留藥量與體外微球釋放曲線進(jìn)行擬合，結(jié)果顯示體內(nèi)外釋放具有較好的相關(guān)性。 6、紫杉醇長(zhǎng)效緩釋注射微球皮下注射的初步安全性評(píng)價(jià) 以小鼠為模型，白細(xì)胞數(shù)量為指標(biāo)，評(píng)價(jià)了紫杉醇微球?qū)τ谛∈笱旱亩拘?；同時(shí)對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)的小鼠皮膚進(jìn)行病理切片觀察，評(píng)價(jià)紫杉醇微球的皮下注射對(duì)于局部組織的損傷程度。結(jié)果表明微球注射給藥后，