老齡大鼠心臟缺血預(yù)處理后HSP27與αB-crystallin的變化.pdf

1、目的：心肌缺血再灌注損傷(IRI)是制約急性心肌梗死患者從成功的再灌注療法中獲取最佳效益的主要因素之一，缺血預(yù)處理(IPC)可以明顯減輕缺血再灌注對心肌組織等的損傷作用。小分子熱休克蛋白在成年大鼠缺血預(yù)處理中的保護作用已比較明確，但是有研究提示老齡大鼠中喪失IPC的保護作用，本研究旨在觀察在成年大鼠及老齡大鼠心肌IPC時熱休克蛋白27(HSP27)及αB晶體蛋白(αBC)的mRNA、蛋白表達量及其變化規(guī)律的異同，以了解老齡大鼠喪失IPC

2、與心肌細胞小分子熱休克蛋白隨年齡改變的關(guān)系，為闡明老齡心臟適應(yīng)性減低和對損傷易感性增加的本質(zhì)及調(diào)控機理提供基礎(chǔ)。 材料與方法： 1)試驗對象：以成年(8-12周齡)及老齡(20-24月齡)SD大鼠為實驗對象，各年齡組隨機分為6組：假手術(shù)對照組(Ctrl)：開胸持續(xù)灌流60min；預(yù)適應(yīng)組(IPC)：連續(xù)三次進行缺血5min，復(fù)灌5min，完成3個循環(huán)后再分別于0min、5min、15min、45min、60min取樣。每

3、組實驗動物4只。實驗結(jié)束后，取左心室缺血的前壁與非缺血的左室后壁肌組織，立即放入液氮5min，然后存入-70℃低溫冰箱備檢。 2)HSP27及αBc mRNA表達的改變：使用半定量的RT-PCR技術(shù)檢測成年及老齡大鼠中mRNA在在IPC后不同時間點的變化規(guī)律。 3)HSP27及αBC在可溶性胞漿及不溶性細胞結(jié)構(gòu)的分布：使用裂解液裂解細胞，低溫離心后，分別收集含可溶性蛋白的上清液及沉淀部分，采用Wester blot分析H

4、SP27及αBC在IPC后不同時間點的變化規(guī)律。 4)HSP27及αBC在細胞內(nèi)的分布：新鮮冰凍心肌組織采用免疫熒光方法標記兩種sHSPs，在激光共聚焦顯微鏡下觀察成年大鼠及老年大鼠在IPC后HSP27及αBC在不同時間點的分布情況。 結(jié)果： 1)老齡大鼠HSP27及αBC mRNA的基礎(chǔ)表達量與成年大鼠相比未見明顯差異；經(jīng)IPC后約15min，老齡大鼠及成年大鼠HSP27及αBC mRNA的表達即有所增加。

5、 2)老齡大鼠與成年大鼠心室前后壁的HSP27基礎(chǔ)表達量均無明顯的區(qū)別，在缺血預(yù)處理后，老年大鼠心肌αBC的表達量較成年大鼠偏高；成年大鼠心臟缺血預(yù)處理后即刻前壁缺血組織HSP27及αBC從胞漿(上清液)移至不溶性成分細胞骨架(沉淀)，至15min時大部分移到沉淀中，在45 min時HSP27及αBC則幾乎全部復(fù)位到上清中，而老齡大鼠心肌中兩種蛋白在各時間點均未發(fā)生明顯移位。兩組大鼠后壁心肌中的兩種蛋白未見明顯移位。 3)免

6、疫組織學(xué)檢查顯示成年大鼠HSP27在IPC后15min向Z線及Ⅰ帶移位，而αBC向Z線移位的同時也向潤盤部位聚集；老年大鼠中HSP27及αBC的移位程度與成年大鼠相比明顯減弱。 結(jié)論： 1)IPC后老齡大鼠缺血心肌HSP27及αBC mRNA表達量增加，表明老齡大鼠仍具有正常的基因轉(zhuǎn)錄及蛋白合成的能力。 2)IPC后老齡大鼠缺血心肌HSP27及αBC移位能力降低，從而減弱了與相應(yīng)蛋白結(jié)合的能力，影響了其對心肌缺血