大鼠心肌缺血預(yù)處理及缺血-再灌注損傷Apelin變化的研究.pdf

1、第一部分 大鼠心肌缺血預(yù)處理及缺血，再灌注損傷Apelin變化的研究 目的：觀察大鼠心肌缺血／再灌注損傷及預(yù)處理后Apelin變化，探討Apelin在心肌缺血／再灌注損傷及預(yù)處理過程中可能的病理生理作用。 方法：將健康成年雄性Sprague-Dawley(sD)大鼠60只，體重250~350g，隨機分成四組：缺血／再灌注OR)組：缺血20分鐘后再灌注180分鐘；預(yù)處理(IP)組：連續(xù)3次結(jié)扎5min再灌注5min后，重復(fù)

2、缺血／再灌注組操作；正常對照(NC)組：未經(jīng)任何處理；假手術(shù)(SH)組：開胸冠脈穿線但不結(jié)扎。按照第二部分改進的造模方法，成功構(gòu)建大鼠心肌缺血／再灌注損傷及預(yù)處理模型。體表心電圖標(biāo)II導(dǎo)聯(lián)全程記錄，進行心律失常發(fā)生情況數(shù)據(jù)采集及心律失常得分評估；左頸動脈途徑插管測定動脈壓及左心室室內(nèi)壓并進行大鼠血流動力學(xué)變化評估；生化的分析儀檢測心肌酶學(xué)的改變；TTC染色法心肌梗死面積評估；放射免疫測定法(RIA)測定大鼠血漿、左室心肌Apelin-3

3、6蛋白含量變化；免疫組織化學(xué)方法觀察大鼠心肌Apelin表達的強弱；RT-PCR方法探討大鼠心肌ApelinmRNA表達。 結(jié)果：(1)心律失常發(fā)生情況及得分評估：IP組在缺血／再灌注過程中，發(fā)生心律失常起始時間比IR組延遲27．1％(p<0．05)；室速發(fā)生的持續(xù)時間比IR組短77．5％(p<0．01)；室速的發(fā)生率僅為IR組的45％(p<0．05)；室顫發(fā)生的持續(xù)時間比IR組短68．9％(p<0．05)；室顫的發(fā)生率為IR組

4、的30．3％(p<0．05)：心律失常得分僅為IR組的70％(p<0．01)。 (2)頸動脈壓及左室內(nèi)壓血流動力學(xué)變化的評估：血流動力學(xué)在SH組各時相均無統(tǒng)計學(xué)差異；IR組在缺血／再灌注時有下降趨勢，在再灌注5分鐘時相達最低點，與結(jié)扎前比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0．01)；IP組同樣有下降趨勢，在缺血20分鐘時相達最低點，與結(jié)扎前水平比較有統(tǒng)計學(xué)差異。組間比較：IP組及m組比較，IR組下降最明顯；IR組與SH組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<

5、0．01)。IP組與SH組及IR組比較均有差異(P＜0．05)。 (3)心肌酶CK-MB：與SH組比較，IR組顯著升高，SH組僅為IR組的54．5％，(P<0．01)；而IP組與SH組比較，IP組比SH組高27．9％(P<0．05)；IR與IP組比較，IP組比IR組低24．4％(P<0．05)；心肌酶LDH：與SH組比較，IR組顯著升高，SH組僅為IR組的50．5％(P<0．01)；而IP組與SH組比較，，IP組比SH組高22．

6、2％(P<0．05)：IR與IP組比較，IP組LDH比IR組低35．1％(P0．05)；IR組含量是NC組的51．8％(P<0．01)；I

7、P組比NC組減少29．3％(P<0．01)。IP組比IR組含量高，兩者有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0．01)。大鼠心肌組織中Apelin-36濃度：SH組心肌含量是NC組95％(e>0．05)：IR組含量是NC組的51．7％(P<0．01)；IP組比較NC組減少28．4％(P<0．01)。IP組比IR組含量高，兩者有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0．05)。 (6)免疫組化染色：在NC組及SH組中Apelin蛋白表達最高，免疫組化染色呈強陽性；IR組心

8、肌組織中的蛋白表達明顯減少，免疫組化染色呈弱陽性，較NC組染色明顯降低；在IP組，Apelin蛋白表達減少，染色呈陽性，較NC組降低。 (7)心肌ApelinmRNA的表達：IR組明顯降低，僅為NC組的40．2％(P<0．01)；IP組為NC組的65．2％(P<0．01)；IR組比SH組低57．9％(P<0．01)；IP組比SH組低3l，9％(P<0．01)；ApelinmRNA表達水平IP組比IR組高(P<0．05)。

9、 (8)相關(guān)性研究：心率失常得分與心肌組織中Apelin-36蛋白含量呈顯著負相關(guān)(P<0．01)；TTC染色心肌梗死面積大小與心肌組織中Apelin-36含量呈顯著負相關(guān)(P<0．01)。 結(jié)論：在大鼠心肌缺血／再灌注損傷過程中，大鼠血漿和心肌組織中Apelin-36含量減少；心肌中ApelinmRNA表達的減少；心律失常發(fā)生情況及心肌梗死面積的大小與心肌組織中的Apelin-36水平呈負相關(guān)。這些研究結(jié)果提示：心血管小分子的

10、活性肽Apelin參與了大鼠心肌預(yù)處理及缺血／再灌注損傷的病理生理過程，并扮演了重要的保護性角色。 第二部分 大鼠心肌缺血預(yù)處理及缺血，再灌注損傷模型的改進 目的：改進和完善大鼠心肌缺血／再灌注損傷模型的制備，簡化多次缺血預(yù)處理操作，提高制模成功率。 方法：將健康成年雄性Sprague-Dawley(sD)大鼠100只，體重250-350g，隨機分成五組：改進缺血／再灌注(PIR)組；改進預(yù)處理后缺血／再灌注(P

11、IP)組；以往的缺血／再灌注(TIR)組；以往的預(yù)處理后缺血／再灌注(TIP)組和假手術(shù)(SH)組。并對改進組(PIR及PIP)行體表心電圖標(biāo)n導(dǎo)聯(lián)全程記錄，頸動脈插管行血流動力學(xué)測定，生化分析儀檢測心肌酶學(xué)的改變，電子顯微鏡和光學(xué)顯微鏡觀測心肌形態(tài)學(xué)的變化。 結(jié)果：(D造模成功率：PIR組與TIR組分別為95％和55％(P<0．05)；PIP組及TIP組分別為95％和10％(P<0．01)：(2)PIR組及PIP組大鼠心電圖S

12、T抬高，與高聳T融合呈弓背向上的單相曲線；并可記錄到缺血／再灌注過程中各種心律失常的發(fā)生；(3)PIR組及PIP組大鼠壓力波形的改變及頸動脈壓缺血期比穩(wěn)定狀態(tài)下降低20％-30％；(4)心肌酶學(xué)的改變同第一部分。(5)電鏡觀察：PIR組與PIP組心肌有線粒體濃聚、嵴腫脹、局部空泡變性；肌絲溶解斷裂肌節(jié)，長短不一，排列嚴(yán)重紊亂；無Z線，及H帶；SH組無變化。(6)光鏡下HE染色；可見PIR組及PIP組心肌細胞界限不清晰，變性水腫明顯，炎癥