Hsp27促進肝細胞癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機制研究.pdf

1、第一部分、Hsp27促進肝細胞癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機制研究
　　目的：肝細胞癌是一種機制復(fù)雜的惡性腫瘤，其特征為進展迅速、預(yù)后不良。引起肝癌病人死亡的最主要原因是腫瘤的轉(zhuǎn)移，然而肝癌轉(zhuǎn)移的分子機制尚不明確。本研究主要探討熱休克蛋白27（heat shock protein27,Hsp27）促進肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用及其相關(guān)分子機制。
　　方法：熒光定量PCR和western blotting檢測肝癌組織及肝癌細胞系中Hsp27 mR

2、NA和蛋白表達水平。對包含167例肝癌樣本的組織芯片進行免疫組化染色，分析Hsp27表達水平與肝癌患者預(yù)后的關(guān)系。在Hsp27表達較低的SK-Hep1和SMMC7721細胞系中采用慢病毒感染過表達Hsp27，并在Hsp27表達較高的MHCC97H和HCCLM3細胞系中采用shRNA慢病毒感染干擾其表達，通過western blotting檢測過表達或干擾效率。Transwell小室法檢測肝癌細胞的運動侵襲能力，同時建立裸鼠尾靜脈轉(zhuǎn)移模型

3、檢測Hsp27對肝癌轉(zhuǎn)移的影響。運用磷酸化激酶芯片檢測Hsp27激活的信號通路，同時采用PCR-array篩選Hsp27參與調(diào)控的下游轉(zhuǎn)移相關(guān)效應(yīng)分子，并初步解析上下游分子間的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。最后，對Hsp27分子靶向藥物OGX-427在肝癌轉(zhuǎn)移中的作用進行初步研究。
　　結(jié)果：Hsp27在肝癌組織中的表達水平顯著高于對應(yīng)癌旁組織。Keplan-Meier分析提示Hsp27表達水平可有效預(yù)測 HCC患者的總體生存和術(shù)后復(fù)發(fā)。過表達Hsp

4、27明顯促進SK-Hep1和SMMC7721細胞的遷移和侵襲能力，并在體內(nèi)實驗中促進肝癌細胞的肺轉(zhuǎn)移；相反，敲除Hsp27能夠在體內(nèi)和體外實驗中抑制細胞遷移侵襲能力。為了明確Hsp27促進HCC轉(zhuǎn)移機制，運用磷酸化激酶芯片檢測其激活的相關(guān)信號通路。結(jié)果顯示Hsp27過表達上調(diào)Akt磷酸化水平，并能通過p-Akt促進細胞運動侵襲能力的增加。此外，Hsp27聯(lián)合p-Akt對肝癌患者的預(yù)后有較好的預(yù)測價值。轉(zhuǎn)移相關(guān)PCR-array檢測結(jié)果顯

5、示ITGA7和MMP2可能為Hsp27和p-Akt的下游效應(yīng)分子，其功能還需進一步的驗證。最后，本研究還發(fā)現(xiàn)Hsp27的靶向藥物OGX-427可有效降低Hsp27的表達并抑制肝癌細胞的遷移侵襲能力。
　　結(jié)論：Hsp27在肝癌組織中表達上調(diào)并且可以作為肝癌患者預(yù)后的預(yù)測指標(biāo)。Hsp27可能通過Akt/ ITGA7/ MMP2通路發(fā)揮其促進肝癌細胞轉(zhuǎn)移的功能。Hsp27的靶向藥物OGX-427能有效下調(diào)Hsp27的表達，同時顯著抑制

6、肝癌細胞的運動侵襲能力。
　　第二部分、LRG1在肝細胞癌侵襲轉(zhuǎn)移中的抑制作用
　　目的：探索新的轉(zhuǎn)移相關(guān)基因LRG1在HCC中的作用。
　　方法：熒光定量PCR檢測36對肝癌組織及對應(yīng)癌旁組織中LRG1的mRNA表達水平。免疫組化染色分析LRG1在51對肝癌組織芯片中的表達情況及臨床意義。通過LRG1過表達或siRNA干擾其表達，檢測LRG1對肝癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用。
　　結(jié)果：熒光定量PCR及免疫組化染色結(jié)果