Nrf2信號通路在鉛致SH-SY5Y細胞氧化應激中的作用.pdf

1、目的：鉛作為環(huán)境中廣泛存在的重金屬污染物,對人體神經、腎臟、內分泌、免疫、全身血液等各系統(tǒng)產生毒性作用,其毒性作用廣泛且缺乏特異性。長時期低水平的鉛暴露對兒童智能發(fā)育和體格生長的影響更加顯著。本實驗研究神經細胞內Nrf2信號通路是否對鉛暴露所致的氧化應激產生應答及其可能的機制。
　　方法：本實驗以人神經母細胞瘤細胞(SH-SY5Y細胞)為靶細胞。設一個對照組和三個鉛染毒組,三個劑量組分別為低劑量組(5μmol/L)、中劑量組(25

2、μmol/L)和高劑量組(125μmol/L),對體外生長的SH-SY5Y細胞進行染毒。通過2',7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽(2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)熒光探針檢測染毒2h后細胞內活性氧(reaetive oxygen species,ROS)含量;通過二硫代雙硝基苯甲酸(Dithiothymine double-nitrobenzonic acid,DTNB)比色法檢測染毒24

3、h后細胞內谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;通過蛋白印跡(Western Blot)法檢測細胞中蛋白激酶C-δ(protein kinase C-δ,PKC-δ)、酪氨酸激酶2(casein kinase 2,CKⅡ)的表達水平以及胞漿和胞核中核因子E2相關因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)的表達水平。
　　結果：細胞內ROS含量按對照組、低劑量

4、組、中劑量組和高劑量組順序表現(xiàn)出逐漸增加的趨勢,與對照組相比,中劑量組和高劑量組表現(xiàn)出明顯增高且差異有統(tǒng)計學差異(P<0.05);而GSH含量則表現(xiàn)出逐漸降低的趨勢,與對照組相比,各染毒組細胞內GSH含量均表現(xiàn)為顯著降低(P<0.05)。
　　與對照組相比,染毒組胞漿中Nrf2蛋白表達明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),而各染毒組之間的差異不明顯;與對照組相比,高劑量組細胞胞核中Nrf2蛋白表達明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(

5、P<0.05),而低劑量組和中劑量組與對照組相比,胞核中Nrf2蛋白表達無明顯差異。
　　高劑量組細胞染毒6h、12h和24h后,胞漿中Nrf2蛋白表達均明顯降低,與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。而胞核Nrf2表達中,僅有染毒24h后呈現(xiàn)明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),而染毒6h和染毒12h后胞核Nrf2表達與對照組的差異并不明顯。
　　與對照組相比,染毒組細胞PKC-δ蛋白表達明顯升高且差異有統(tǒng)計