不同日齡長(zhǎng)白豬胰島分離和純化的比較研究.pdf

1、胰島移植是治療Ⅰ型糖尿病的最有效方法之一。為解決胰島來(lái)源不足，進(jìn)行異種間胰島移植的研究是治療Ⅰ型糖尿病的研究熱點(diǎn)，而豬胰島被認(rèn)為是人類(lèi)胰島供體的最佳來(lái)源。本試驗(yàn)為探討不同日齡豬胰腺胰島分離純化技術(shù)，以出生1d、60d、120d、165-180d豬為試驗(yàn)動(dòng)物，采用胰管注射法、histopaque純化法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)及組織學(xué)、免疫組織化學(xué)技術(shù)等進(jìn)行胰腺胰島的分離純化試驗(yàn)。結(jié)果表明，豬胰腺胰島獲取量與不同膠原酶消化時(shí)間0min、15min

2、、30min和45min各組間均差異顯著(P＜0.05);胰島獲取量與不同濃度膠原酶1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml各組間均差異顯著(P＜0.05);在相同的消化時(shí)間(15min)條件下，1d和60d采取膠原酶濃度為1.0mg/ml，120d和165-180d膠原酶濃度為1.5mg/ml條件下分離純化，1d豬胰島分離3045±986個(gè)/g，純化后2421±438個(gè)/g，純化度為78％，存活率為92％;60d豬胰島分離

3、2567±873個(gè)/g，純化后1938±362個(gè)/g，純度為74％，存活率94％;120d齡豬胰島分離1969±547個(gè)/g，純化后1562±236個(gè)/g，純度為79％，存活率90％;165-180d齡豬胰島分離1758±125個(gè)/g，純化后1485±119個(gè)/g，純度為84％存活率為92％;1d胰島素釋放量高糖組為788.56±77.53mIU/胰島，低糖組為158.37±28.44mIU/胰島;165-180 d豬胰島素釋放量高糖組

4、為679.58±68.69mIU/胰島，低糖組為102.43±23.12mIU/胰島;顯微鏡下HE染色測(cè)量結(jié)果1d豬胰島直徑一般為35±10μm，60d豬胰島直徑一般為62±20μm，120d齡豬胰島直徑一般為94±30μm，165-180d豬胰島直徑一般為158±60μm;DTZ染色測(cè)量結(jié)果1d豬胰島直徑一般為33±9μm，60d豬胰島直徑一般為64±20μm，120d齡豬胰島直徑一般為91±32μm，165-180d豬胰島直徑一般為

5、143±54μm。
　　由此可知，出生后不同階段豬胰腺胰島分離純化的條件存在差異，1d、60d豬胰島分離純化的最佳條件為熱缺血時(shí)間小于10min、冷缺血時(shí)間小于30min、膠原酶Ⅴ濃度為1.0mg/ml、消化時(shí)間為15min，而120d、165-180d日齡豬胰島分離純化最佳條件為熱缺血時(shí)間小于10min、冷缺血時(shí)間小于30min、膠原酶Ⅴ濃度為1.5mg/ml、消化時(shí)間為15min。1d和120d長(zhǎng)白豬胰島分化能力、胰島數(shù)量及胰