利用雙向電泳和質(zhì)譜技術(shù)篩選矽肺血清差異蛋白.pdf

1、矽肺是由于長(zhǎng)期吸入游離二氧化硅(SiO<,2>)粉塵所引起的以肺間質(zhì)纖維化為主的全身性疾病，是常見的、危害最嚴(yán)重的職業(yè)病之一，病情嚴(yán)重、死亡率高。停止粉塵暴露，病程依然進(jìn)展。2005年全國各類職業(yè)病報(bào)告12 212例，其中塵肺病病例報(bào)告9 173例，而矽肺病例占?jí)m肺總病例約50％。矽肺所造成的經(jīng)濟(jì)損失十分巨大，據(jù)專家估算，年直接經(jīng)濟(jì)損失約90億元人民幣，間接損失更大。由于矽肺發(fā)病迅速，早期診斷和干預(yù)尤顯重要。直至現(xiàn)在，矽肺的發(fā)病機(jī)理仍然

2、不完全清楚，無早期診斷的特異性標(biāo)志物，也無特異性的治療藥物和方法。近年來蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，為研究疾病發(fā)病機(jī)制和探索早期診斷(篩檢)的生物標(biāo)記物，提供了新的思路和技術(shù)平臺(tái)。由于矽肺纖維化過程中有許多反應(yīng)氧物質(zhì)(reactive oxygen species，ROS)和反應(yīng)氮物質(zhì)(reactive nitrogen species，RNS)等氧化劑、炎癥細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、凋亡及抗凋亡因子以及有關(guān)信號(hào)通路的小分子物質(zhì)參與，這些蛋白質(zhì)

3、或小分子物質(zhì)在肺組織中的變化必然會(huì)通過相應(yīng)的途徑釋放至血清，引起其在血清中的濃度變化，同時(shí)也會(huì)級(jí)聯(lián)其它一些相關(guān)蛋白質(zhì)發(fā)生相應(yīng)變化，從理論上為矽肺的血清差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究提供了依據(jù)。本研究采用雙向凝膠電泳(2-DE)和基質(zhì)輔助激光解吸飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS/MS)對(duì)矽塵暴露人群和對(duì)照組人群血清進(jìn)行比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究，尋找矽肺血清差異蛋白，探索早期診斷(篩檢)的生物標(biāo)記物，以期為預(yù)防和早期治療矽肺提供幫助。 目的

4、 建立正常人和矽肺人群血清雙向電泳圖譜，尋找矽肺血清差異蛋白，進(jìn)一步探索其發(fā)病機(jī)制及潛在生物標(biāo)記物。 方法 按照國家塵肺病診斷標(biāo)準(zhǔn)(GBZ70-2002)，選擇山西省陽泉市某硫鐵礦診斷為矽塵暴露(0)、可疑矽肺(0<'+>)、一期矽肺(Ⅰ)的工人為研究對(duì)象。并選擇當(dāng)?shù)赝挲g組的健康人群作為對(duì)照。各組均選取30例研究對(duì)象，采用雙向凝膠電泳(2-DE)和基質(zhì)輔助激光解吸飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS/MS

5、)技術(shù)，對(duì)矽塵暴露(0)、可疑矽肺(0<'+>)、一期矽肺(Ⅰ)和對(duì)照組人群混和血清進(jìn)行比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究，尋找矽肺發(fā)病過程中血清差異表達(dá)蛋白。 結(jié)果 初步發(fā)現(xiàn)了補(bǔ)體C4、富亮氨酸α-2糖蛋白、α一1抗胰蛋白酶在O<'+>組血清中表達(dá)顯著升高(P<0.01)，在對(duì)照組、0組、Ⅰ組中表達(dá)均較低；轉(zhuǎn)鐵蛋白則在0<'+>組血清中表達(dá)顯著下調(diào)(P<0.01)。血漿谷胱甘肽過氧化物酶、四連接素、載脂蛋白A-Ⅰ，甲狀腺素運(yùn)載蛋白在對(duì)

6、照組和0組血清中表達(dá)相當(dāng)，隨著肺纖維化的進(jìn)展，在0<'+>和Ⅰ組中逐漸下降。 結(jié)論 1．補(bǔ)體C4、富亮氨酸α-2糖蛋白、α-1抗胰蛋白酶、轉(zhuǎn)鐵蛋白在可疑矽肺(0<'+>)組血清中表達(dá)發(fā)生顯著變化，提示其與矽肺發(fā)病過程中早期的溶細(xì)胞及炎癥反應(yīng)可能存在某種關(guān)聯(lián)，并可能具有反映矽肺早期病變的潛在參考價(jià)值。 2．血漿谷胱甘肽過氧化物酶、四連接素、載脂蛋白A-Ⅰ和甲狀腺素運(yùn)載蛋白隨肺纖維化的進(jìn)展發(fā)生了差異表達(dá)，可能與矽肺后