小細(xì)胞肺癌血漿差異蛋白的雙向電泳-質(zhì)譜分析.pdf

1、目的:本研究應(yīng)用雙向熒光差異凝膠電泳(two-dimensional fluorescencedifference gel electrophoresis,2-D DIGE)和液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(Liquidchromat ography masss pectrometry簡稱LC-MS/MS)方法,研究小細(xì)胞肺癌患者與健康對照者血漿蛋白質(zhì)組表達(dá)的差異;尋找并鑒定與小細(xì)胞肺癌癌變相關(guān)的蛋白。
　　 方法:以小細(xì)胞肺癌患者及健康者血

2、漿為研究對象,應(yīng)用ExtractAlbumin/IgG Removal Kit,2D Clean-up Kit試劑盒,對血漿樣品進(jìn)行預(yù)處理;采用雙向熒光差異凝膠電泳實(shí)驗(yàn)方法,對其各組樣品進(jìn)行熒光標(biāo)記后,行一向固相梯度等電聚焦電泳(Isoelectric focusing簡稱IEF)和二向SDS聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳(Polyaerylamide gel electrophoresis簡稱SDS-PAGE);應(yīng)用Typhoon9400激光

3、掃描儀成像,得到不同通道的蛋白質(zhì)組圖;采用DeCyder6.5軟件進(jìn)行分析,找到其具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異蛋白點(diǎn);應(yīng)用液相色譜質(zhì)譜(LC-MS/MS)獲得肽質(zhì)量指紋圖;通過搜索NCBIpro蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫,鑒定與腫瘤相關(guān)蛋白質(zhì)。
　　 結(jié)果:
　　 1.采用優(yōu)化的雙向熒光差異凝膠電泳技術(shù)獲得了重復(fù)性良好的小細(xì)胞腫癌患者和健康者的血漿蛋白質(zhì)2-D DIGE圖譜:結(jié)合Dccyder6.5分析軟件,發(fā)現(xiàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)

4、的蛋白點(diǎn)共有147個,選取85個蛋白點(diǎn)行質(zhì)譜鑒定,其中在小細(xì)胞肺癌中上調(diào)的蛋白點(diǎn)有16個(334、324、431、443、446、451、465、488、517、695、696、740、768、966、970、971),443、465可找到相匹配的蛋白:下調(diào)蛋白點(diǎn)有25個(178、179、248、253、257、258、390、400、515、527、548、569、570,571,572、574、576、577、578、581、585

5、、594、596、604、880),178、179、248、257、400、515、572、585可找到其相匹配的蛋白,其它的蛋白點(diǎn)均為未知蛋白質(zhì)。
　　 2.經(jīng)過NCBIpro蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫檢索分析,根據(jù)其分子量、等電點(diǎn)及得分,鑒定其下調(diào)蛋白部分為:Alpha-2-macroglobulin,Pregnancyzoneprotein;Complement C3,Cemloplasmin;Serotransferrin,Hemop

6、exim,Iggamma-3 chain C,haptoglobin等;鑒定其上調(diào)蛋白為:Complemem C9,Angiotensinogen;目前尚存在一些蛋白點(diǎn)在蛋白數(shù)據(jù)庫中未找到其相匹配的蛋白質(zhì),由于雙向凝膠電泳的分辨力,或質(zhì)譜分析敏感性的限制,以及部分蛋白質(zhì)可能是未發(fā)現(xiàn)的新蛋白,有待進(jìn)一步研究。
　　 結(jié)論:
　　 1.應(yīng)用雙向熒光差異凝膠電泳聯(lián)合液相色譜質(zhì)譜技術(shù)成功的篩選并鑒定出了小細(xì)胞肺癌患者和健康人血漿