雙向電泳與質(zhì)譜相結(jié)合篩選雞腦組織中TOCP誘發(fā)OPIDN相關(guān)蛋白.pdf

1、目的：以“有機(jī)磷化合物和PMSF的雙受體影響”假說(shuō)為理論依據(jù)，通過(guò)雙向電泳和質(zhì)譜分析，篩選OPIDN誘發(fā)相關(guān)差異表達(dá)蛋白，并探討TOCP的OPIDN作用機(jī)制。
　　 方法：羅曼鶴母雞24只，10月齡，體重1.5～2.0kg，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后用于試驗(yàn)。根據(jù)“雙受體影響假說(shuō)”分別將雞隨機(jī)分為4組，即對(duì)照組、TOCP組、PMSF組和PMSF+TOCP組。TOCP用量為1000mg/kg，經(jīng)灌胃一次給予、PMSF用量為40mg/kg，經(jīng)

2、皮下注射一次給予。PMSF+TOCP組為先給PMSF，24小時(shí)后再給TOCP。染毒后7天處死動(dòng)物，取各組動(dòng)物腦組織。并且測(cè)定四組雞大腦雙向電泳表達(dá)圖譜。在雙向電泳表達(dá)圖譜篩選差異明顯的點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。
　　 雙向電泳原始文件用imagemaster2Dplatinum軟件搜索相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)，蛋白表達(dá)差異2倍以上的點(diǎn)視為差異顯著。將差異表達(dá)蛋白點(diǎn)的肽質(zhì)量指紋譜和分子量、等電點(diǎn)的數(shù)據(jù)輸入計(jì)算機(jī)，用MASCOT軟件的MS MS離子方式在

3、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索，找尋與之匹配的相關(guān)蛋白質(zhì)，同時(shí)查詢其功能。肽質(zhì)量指紋譜容許誤差0.3Da，分子量容許誤差±20％。
　　 結(jié)果：在對(duì)照組和1000mg/kgTOCP染毒組的雞大腦總蛋白中分別檢測(cè)到1332和1295個(gè)蛋白點(diǎn)，能相互匹配的占78.31%。PMSF和PMSF+TOCP兩組分別檢測(cè)到1295和1294個(gè)蛋白點(diǎn)，且與對(duì)照組的匹配率均大于75%。與對(duì)照組相比，TOCP染毒組雞腦中具有顯著差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)有236個(gè)，其中

4、差異達(dá)到4倍以上的蛋白點(diǎn)數(shù)有32個(gè)。根據(jù)“雙受體影響假說(shuō)”篩選出其中差異最明顯的4個(gè)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，鑒定結(jié)果為1612點(diǎn)主要為谷氨酰胺(GS)，等電點(diǎn)為8.26，分子量為31.66kD。1171點(diǎn)為熱休克蛋白70(HSP-70)，等電點(diǎn)為7.57，分子量為41.81kD。1457點(diǎn)為乳酸脫氫酶(LDH-B)，等電點(diǎn)為7.71，分子量為35.58kD。1067點(diǎn)荷馬蛋白(homer-1b)，等電點(diǎn)為5.54，分子量為44.40kD。且這四