藥物流產(chǎn)后絨毛組織中P-糖蛋白、EMMPRIN和MMPs與子宮異常出血的關系研究.pdf

1、本研究分為三部分：
　　 第一部分：藥物流產(chǎn)后絨毛組織中P-糖蛋白與子宮異常出血的關系
　　 目的：通過檢測P-糖蛋白在藥流成功組和出血組絨毛組織中的表達，以及檢測在人早孕期滋養(yǎng)細胞內(nèi)米非司酮的濃度，探討P-糖蛋白與藥物流產(chǎn)后子宮異常出血的關系及其可能機制。
　　 材料與方法：選擇自愿要求行藥物產(chǎn)的早孕婦女，收集服米索前列醇當天排出的絨毛組織，根據(jù)隨訪結果分藥流成功組（37例）和出血組（37例）。采用免疫組織化學

2、法和蛋白免疫印跡(Western Blotting)檢測兩組絨毛組織中P-糖蛋白的表達水平。體外培養(yǎng)早孕期絨毛滋養(yǎng)細胞，分實驗組（20μM CsA組和40μM CsA組）和對照組，以及每組加米非司酮（分0.5μM組、1.25μm，組和2.5μM組)后，用高效液相法分析絨毛滋養(yǎng)細胞內(nèi)米非司酮的濃度。
　　 結果：P-糖蛋白主要定位于合體滋養(yǎng)細胞膜上；藥流出血組P-糖蛋白的表達水平高于藥流成功組(P<0.05)；不同米非司酮濃度（0

3、.5μM、1.25μM和2.5μM）的各組（20μM CsA組、40μM CsA組和對照組）間均無顯著性差異(P>0.05)。
　　 結論：藥物流產(chǎn)后絨毛組織中P-糖蛋白的高表達可能與子宮異常出血有關；在滋養(yǎng)細胞，P-糖蛋白不是通過將米非司酮從細胞內(nèi)泵出，降低細胞內(nèi)的濃度起作用的，即米非司酮可能不是P-糖蛋白的作用底物。
　　 第二部分：藥物流產(chǎn)后絨毛組織中MMP-2、MMP-9和EMMPRIN與子宮異常出血的關系

4、>　　 目的：通過檢測絨毛組織中MMP-2和MMP-9活性和其蛋白以及EMMPRIN在藥流成功組和出血組的表達，探討EMMPRIN、MMP-2和MMP-9與藥物流產(chǎn)后子宮異常出血的關系。
　　 材料與方法：選擇自愿要求行藥物流產(chǎn)的早孕婦女，收集服米索前列醇當天排出的絨毛組織，根據(jù)隨訪結果分藥流成功組（37例）和出血組（37例）。采用明膠酶譜法檢測絨毛組織中MMP-2和MMP-9的活性，采用免疫組織化學法檢測兩組絨毛組織中MMP

5、-2和MMP-9的蛋白表達水平。采用免疫組織化學法和蛋白免疫印跡（Western Blotting）檢測兩組絨毛組織中EMMPRIN蛋白表達水平。
　　 結果：絨毛組織中MMP-9表達水平藥流出血組高于藥流成功組(P<0.001)，而MMP-2的表達水平兩組無顯著性差異(P>0.05)。兩組絨毛組織中均未檢測到MMP-2和MMP-9的活性。EMMPRIN主要定位于合體滋養(yǎng)細胞和細胞滋養(yǎng)細胞胞漿和胞膜，蛋白表達水平藥流出血組低于藥

6、流成功組(P<0.05)。
　　 結論：藥物流產(chǎn)后絨毛組織中MMP-9高表達及EMMPRIN低表達可能與子宮異常出血有關；而MMP-2表達可能與子宮異常出血無關。
　　 第三部分：人滋養(yǎng)細胞P-糖蛋白與EMMPRIN的相互作用
　　 目的：探討P-糖蛋白和EMMPRIN之間的相互作用。
　　 材料與方法：選擇自愿要求行人工流產(chǎn)術的早孕婦女，收集行人工流產(chǎn)時的絨毛組織進行組織塊培養(yǎng)24小時和48小時，加P-

7、糖蛋白抑制劑（分20μM CsA組和40μM CsA組），采用Western Blotting法檢測EMMPRIN蛋白的表達水平；加EMMPRIN單克隆抗體（分2.5μg/ml MEM-M6/1組和5.0μg/ml MEM-M6/1組），采用Western Blotting法檢測P-糖蛋白的表達水平。
　　 結果：加P-糖蛋白抑制劑24小時和48小時后，EMMPRIN的表達水平在20μMCsA組、40μM CsA組和對照組三者之

8、間均無顯著性差異(P＞0.05)。加EMMPRIN單克隆抗體培養(yǎng)24小時后，P-糖蛋白蛋白水平在2.5μg/ml MEM-M6/1組、5.0μg/mlMEM-M6/1組均比對照組低，差異均有顯著性(P<0.001)。培養(yǎng)48小時后，P-糖蛋白表達水平在2.5μg/ml MEM-M6/1組、5.0μg/ml MEM-M6/1組和對照組三者之間差異均無顯著性(P>0.05)。
　　 結論：在人滋養(yǎng)細胞P-糖蛋白對EMMPRIN的表達