耐藥逆轉(zhuǎn)劑對(duì)人乳腺癌細(xì)胞P-糖蛋白、EMMPRIN和MMPs表達(dá)的影響.pdf

1、腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的多藥耐藥(multidrugresistance,MDR)和腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是困擾腫瘤臨床治療的兩大關(guān)鍵性難題。腫瘤耐藥產(chǎn)生的原因和機(jī)制非常復(fù)雜,目前研究發(fā)現(xiàn)腫瘤耐藥與mdrl基因編碼的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)過(guò)度表達(dá)有關(guān)。P-gp是一種分子量為170KD的跨膜糖蛋白,具有ATP依賴(lài)的藥物泵作用,能將多種結(jié)構(gòu)不同的化療藥物轉(zhuǎn)運(yùn)出細(xì)胞,從而使細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低,導(dǎo)致耐藥。目前,尋求腫瘤多藥耐藥

2、逆轉(zhuǎn)劑或逆轉(zhuǎn)方法的研究也主要集中于P-gp介導(dǎo)的MDR,其中鈣通道阻滯劑川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)可抑制mdr1基因表達(dá),減少P-gp合成,保持化療藥物在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的濃度,從而達(dá)到逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥的目的。
　　 腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟、多因素的過(guò)程,細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix,ECM)的降解是腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵一步,基質(zhì)金屬蛋白酶類(lèi)(matrixmetalloprotein

3、ase,MMPs)幾乎能夠降解ECM的所有成分,促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。EMMPRIN(extracellularmatrixmetalloproteinaseinducer,CD147,basigin)為免疫球蛋白超家族成員,是單次跨膜糖蛋白,在腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá),能促進(jìn)成纖維細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生MMPs,與腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
　　 本課題組前期研究表明腫瘤耐藥和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移之間存在著一定聯(lián)系:耐藥細(xì)胞與敏感細(xì)胞相比,耐藥細(xì)胞表達(dá)更

4、高的EMMPRIN和MMPs,同時(shí)還發(fā)現(xiàn)P-gp底物能促進(jìn)耐藥腫瘤細(xì)胞EMMPRIN和MMPs的表達(dá),增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移能力。上述研究提示臨床上不恰當(dāng)?shù)鼗熡锌赡艽龠M(jìn)癌細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移,對(duì)腫瘤患者的病情產(chǎn)生不利影響。采用有效逆轉(zhuǎn)MDR的藥物逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥,能否同時(shí)影響腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移特性,國(guó)內(nèi)外還未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。
　　 本課題研究的目的即觀察耐藥逆轉(zhuǎn)劑TMP對(duì)耐藥的人乳腺癌細(xì)胞MCF7/AdrP-gp、EMMPRIN、MMP2和MM

5、P9表達(dá)的影響,并探討其可能的作用機(jī)制。采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法測(cè)定TMP和阿霉素(adriamycin,ADM)的細(xì)胞毒性作用及TMP的耐藥逆轉(zhuǎn)作用;熒光分光光度法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ADM的熒光強(qiáng)度:RealtimeRT-PCR和Westernblot檢測(cè)細(xì)胞P-gp、EMMPRIN、MMP2和MMP9mRNA和蛋白水平的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)(1)≤1280μg/mL的TMP對(duì)MCF7/Adr無(wú)明顯細(xì)胞毒作用(細(xì)胞存活率＞192.9％),

6、MCF7/Adr對(duì)≤1μg/mL的ADM完全耐受(細(xì)胞存活率≥96％);(2)TMP與ADM聯(lián)合作用于細(xì)胞,與單用ADM相比,細(xì)胞存活率明顯下降,細(xì)胞內(nèi)ADM的熒光強(qiáng)度明顯升高(P＜0.05);(3)與對(duì)照組相比,ADM能上調(diào)細(xì)胞P-gP、EMMPRlN、MMP2和MMP9蛋白表達(dá),TMP單獨(dú)或與ADM聯(lián)合應(yīng)用均能下調(diào)細(xì)胞P-gP、EMMPRIN、MMP2和MMP9蛋白及mRNA水平。上述結(jié)果表明TMP在有效逆轉(zhuǎn)腫瘤MDR的同時(shí),還能抑