枸杞多糖對P-糖蛋白影響的研究.pdf

1、一、目的
　　 研究枸杞多糖對P-糖蛋白功能及表達(dá)的影響，以及枸杞多糖對P-糖蛋白底物羅丹明-123在Caco-2細(xì)胞單層模型上雙向轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。
　　 二、方法
　　 1、細(xì)胞培養(yǎng)及毒性試驗(yàn)
　　 細(xì)胞免疫熒光法進(jìn)行P-糖蛋白表達(dá)驗(yàn)證。
　　 用MTT法分別考察枸杞多糖、環(huán)孢素A和維拉帕米對Caco-2細(xì)胞及ECV304細(xì)胞的毒性。
　　 2、枸杞多糖對P-糖蛋白功能的影響
　　

2、考察枸杞多糖對羅丹明-123外排的影響，從而確定枸杞多糖對P-糖蛋白功能的影響。
　　 3、枸杞多糖對P-糖蛋白表達(dá)量的影響
　　 考察枸杞多糖對P-糖蛋白表達(dá)的影響，從而確定枸杞多糖對P-糖蛋白表達(dá)的影響
　　 4、枸杞多糖對羅丹明-123轉(zhuǎn)運(yùn)的影響
　　 首先在建立Caco-2細(xì)胞單層模型考察枸杞多糖對羅丹明-123跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能的影響。
　　 三、結(jié)果
　　 1、細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞毒性

3、實(shí)驗(yàn)
　　 Caco-2細(xì)胞和ECV304細(xì)胞形態(tài)正常，生長旺盛，Caco-2細(xì)胞高表達(dá)P-糖蛋白，ECV304低表達(dá)P-糖蛋白。
　　 MTT結(jié)果顯示，枸杞多糖、維拉帕米和環(huán)孢素A分別在10-150μg/mL、0.01-100μmol/L和0.01-10μmol/L范圍內(nèi)對Caco-2細(xì)胞為非細(xì)胞毒性劑量。
　　 2、枸杞多糖對P-糖蛋白功能的影響
　　 枸杞多糖各濃度組對P-糖蛋白的功能有一定的抑制作

4、用。
　　 3、枸杞多糖對P-糖蛋白表達(dá)的影響
　　 枸杞多糖在一定濃度范圍內(nèi)能顯著上調(diào)P-糖蛋白的表達(dá)水平，結(jié)果與功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果相反。
　　 4、枸杞多糖對羅丹明-123轉(zhuǎn)運(yùn)的影響
　　 枸杞多糖對羅丹明-123的外排轉(zhuǎn)運(yùn)表現(xiàn)出抑制作用，與功能結(jié)果同為抑制作用。
　　 四、結(jié)論
　　 1、枸杞多糖對P-糖蛋白具有瞬時(shí)抑制功能和72小時(shí)的表達(dá)上調(diào)作用，因此，枸杞多糖對P-糖蛋白的作用的最終結(jié)