2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景及目的:前列腺癌(prostate cancer,PCa)是中、老年男性常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤。隨著以前列腺特異性抗原(prostate specific antigen,PSA)篩查代表的前列腺癌早期篩查技術(shù)在全球的推廣,近二十年來,前列腺癌的發(fā)病率不斷上升,最近的研究顯示,在全球男性癌癥中,前列腺癌的發(fā)病率和病死率已分別居第二位和第六位。在美國,前列腺癌的發(fā)病率位居男性惡性腫瘤之首,病死率僅次于肺癌,是40歲以上男性癌癥第二位死

2、因。近年來,隨著中國社會老齡化程度的加劇、國民健康體檢意識的增強以及腫瘤檢測技術(shù)的提高,伴隨人們居住環(huán)境和生活習慣的改變,前列腺癌的發(fā)病率呈逐年遞增趨勢。因此,近年來針對前列腺癌發(fā)生、發(fā)展的分子機制和臨床上如何早期診斷、治療、判斷預后的研究已經(jīng)成為全球泌尿外科的重點研究領(lǐng)域之一。
  目前,以前列腺癌根治術(shù)為代表的手術(shù)切除方式是治療局限性前列腺癌最有效的方法之一,然而對于診斷為進展期前列腺癌:高血清PSA值,高Gleason評分、

3、且發(fā)生局部或遠處轉(zhuǎn)移,和局限性前列腺癌根治術(shù)后出現(xiàn)生化復發(fā)或遠處轉(zhuǎn)移的患者,首選治療方案是內(nèi)分泌治療。內(nèi)分泌治療又稱雄激素剝奪治療對雄激素依賴型前列腺癌療效確切,但雄激素剝奪治療中位有效時間僅為14-28月,幾乎所有患者最終都將發(fā)展為雄激素非依賴前列腺癌(AIPC)而對雄激素剝奪治療不敏感,對于這類病人,目前缺乏能有效控制病情的治療方案。
  TPD52L2分子又稱TPD54/D54,是腫瘤蛋白家族D52(tumor protei

4、nD52,TPD52)的成員之一。TPD52家族是在研究乳腺癌中差異表達的基因時第一次被發(fā)現(xiàn)。該家族蛋白的特征結(jié)構(gòu)是N端具有相類似的雙股卷曲螺旋結(jié)構(gòu)(coil-coiledmotif)。TPD52家族最重要的生理功能是參與Ca2+依賴的膜泡運輸過程的調(diào)節(jié)。同時研究顯示,該家族成員蛋白在非精原細胞癌、精原細胞癌、導管和小葉型乳腺癌、肝細胞癌、口腔鱗癌等多種腫瘤組織中過量表達,提示TPD52家族可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。TPD

5、52L2作為家族的新成員,定位于20q13.2-q13.3。近年來,腦膠質(zhì)瘤細胞研究提示:敲減TPD52L2分子可以抑制細胞生長和克隆形成并將細胞阻滯在G0/G1期。在口腔鱗癌細胞中,敲減TPD52L2同樣能抑制細胞生長并促進凋亡,然而在前列腺癌組織和細胞中,關(guān)于TPD52L2的研究尚無人報道。
  目的:探討TPD52L2在前列腺癌組織中的表達水平與患者預后的關(guān)系,及與已知臨床預后因素的相關(guān)性;建立TPD52L2表達沉默的激素非

6、依賴性前列腺癌細胞模型,研究TPD52L2對激素非依賴性前列腺癌細胞的細胞功能和生物學行為的影響,并探索其可能發(fā)揮作用的分子機制。
  方法、結(jié)果:
 ?。ㄒ唬┣傲邢侔┡R床標本TPD52L2表達水平檢測和患者預后分析我們收集了長征醫(yī)院泌尿外科2010-2012年117例接受前列腺癌根治術(shù)患者的臨床信息和組織標本及術(shù)后隨訪信息。前列腺癌患者臨床信息包括患者診斷時年齡、術(shù)前PSA、術(shù)后病理分期、Gleason評分、病理T分期、包

7、膜侵犯、切緣陽性、周圍神經(jīng)侵犯和精囊侵犯等。所有腫瘤相關(guān)組織標本分為癌和癌旁兩部分,每部分各分兩份分別放液氮和福爾馬林浸泡保存。術(shù)后隨訪信息包括生化復發(fā)時間。我們采用免疫組化、qPCR方法對所有組織標本進行TPD52L2表達水平檢測,并與患者臨床和預后信息做相關(guān)性分析,結(jié)果提示:相對于前列腺癌旁組織,前列腺癌組織中TPD52L2表達水平明顯升高,并與術(shù)后Gleason評分呈正相關(guān);生存分析提示:相對于TPD52L2高表達患者,低表達患者

8、無生化復發(fā)時間具有明顯優(yōu)勢。多因素分析提示:TPD52L2表達量、Gleason評分和病理T分期是前列腺癌患者生化復發(fā)的獨立預后因素。
 ?。ǘ?gòu)建激素非依賴性前列腺癌細胞株TPD52L2敲減模型作為前期準備工作,我們檢測了各種前列腺癌細胞系中TPD52L2的表達水平,確定相對高表達TPD52L2并且惡性程度較高的DU145和PC-3兩株細胞系作為我們的實驗對象,并用已經(jīng)構(gòu)建好的靶向沉默TPD52L2基因的shRNA慢病毒對這兩

9、株前列腺癌細胞進行感染,觀察并記錄慢病毒自身熒光報告基因(GFP)表達情況,燃后分別利用qPCR技術(shù)和蛋白印記(western blot)對TPD52L2基因的敲減效率進行mRNA和蛋白水平的檢測,結(jié)果提示shRNA慢病毒載體明顯下調(diào)了DU145和PC-3細胞中TPD52L2的表達。
  (三)沉默TPD52L2基因?qū)に胤且蕾囆郧傲邢侔┘毎關(guān)C-3和DU145的增殖和克隆形成能力、細胞周期及細胞遷移能力的影響本實驗環(huán)節(jié),我們應(yīng)

10、用已構(gòu)建的TPD52L2穩(wěn)定下調(diào)的激素非依賴性前列腺癌細胞株模型,研究TPD52L2對激素非依賴性前列腺癌細胞功能和生物學行為的影響。在已確定通過Lv-shRNA成功下調(diào)TPD52L2表達水平的PC-3和DU145前列腺癌細胞株中,進行MTT細胞增殖實驗、克隆形成實驗、細胞周期分析實驗和細胞遷移實驗。和對照組Lv-shCON轉(zhuǎn)染的細胞相比,Lv-shTPD52L2轉(zhuǎn)染的兩株細胞系的生長明顯受到抑制、克隆形成能力下降、細胞遷移能力下降,差

11、異均有統(tǒng)計學意義。并且在DU145細胞系中,Lv-shTPD52L2轉(zhuǎn)染細胞出現(xiàn)S期阻滯現(xiàn)象。
  結(jié)論:通過以上實驗,我們得出結(jié)論如下:TPD52L2在前列腺癌組織中過量表達,與Gleason評分呈正相關(guān),并且是前列腺癌根治術(shù)患者術(shù)后生化復發(fā)的獨立預后因素。進一步體外細胞實驗提示,沉默TPD52L2的表達可抑制激素非依賴性前列腺癌細胞的相關(guān)腫瘤生物學功能及特性,說明TPD52L2在腫瘤發(fā)生和進展及激素非依賴表型轉(zhuǎn)化中可能發(fā)揮重要

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