大鼠局灶性腦缺血誘導VEGF及HIF-1α表達的研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文大鼠局灶性腦缺血誘導VEGF及HIF1α表達的研究姓名：宋芷珩申請學位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學指導教師：張朝東20030401實驗材料與方法1實驗動物及分組：健康雄性Wistar大鼠50只，均由中國醫(yī)科大學動物實驗中心提供，實驗前體重(270410)克。隨機分成免疫組化方法試驗組和RT—PCR方法試驗組兩個試驗組組成：①免疫組化組(1—5組)：5組分別對應有假手術組、局灶腦缺血再灌4h組、8h組、24h組和72h

2、組等時間點，每個時間點11=5；②RT—FCR組(1—5組)：5組同免疫組化組，即分別對應有假手術組、局灶腦缺血再灌4h組、8h組、24h組和72h組等時間點，每個時間點n=5。2方法：采用ZeaLonga改良的動脈線栓法制備大鼠局灶腦缺血再灌模型，大鼠于MCA阻斷2小時，按再灌注不同時間即4h、8h、24h、72h等時間點斷頭取腦。(1)免疫組化各組大鼠在規(guī)定的時間用10％水合氯醛麻醉，4％多聚甲醛一001MPBS液(PH值74)固定

3、后取材，石蠟包埋，連續(xù)切片，常規(guī)HE染色切片；免疫組織化學SABC法檢測VEGF、HIF一1d蛋白。應用MetanlorphImagingSystemV46軟件分別測定VEGF、HIF一1d陽性反應物平均面密度值，對各時間點VEGF、HIF一1o【免疫組化陽性細胞與假手術組比較定量分析，進行方差檢驗。(2)①RT—PCR各組在規(guī)定的時間迅速斷頭取腦，剝取半暗帶的腦皮質組織于一72。C冰箱中凍存；②大鼠腦組織總RNA的提?。喝?00mg組