重組腺病毒HIF-1α對大鼠局灶性腦缺血灌注損傷后AKT與BAD表達影響的研究.pdf

1、目的：探討重組腺病毒HIF-1α（Recombinant adenovirus Containing Hypoxia-inducible Factor1αgene，AdHIF-1α）干預大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的作用，以及 AdHIF-1α對AKT、p-AKT及BAD的表達影響，為闡明AdHIF-1α的抗細胞凋亡機制提供依據(jù)。
　　方法：將 SD雄性大鼠隨機分為：正常對照組（Normal），假手術組(Sham)，局灶性腦缺血再灌

2、注組（CIR）,重組腺病毒空載體組（Ad），重組腺病毒HIF-1α干預組（AdHIF-1α）。根據(jù)再灌注時間，將各組分為4個亞組，即：6h、24h、48h、72h組；采用線栓法制備局灶性腦缺血再灌注損傷模型。腦部立體定位儀定位側腦室注射，Normal組及Sham組注射生理鹽水，Ad組注射Ad，AdHIF-1α干預組注射 AdHIF-1α。模型成功后，按各亞組時間點進行神經(jīng)功能缺失體征評分，取新鮮腦組織測量梗死側腦組織腦水含量；行組織冰凍

3、切片證實基因注射進入側腦室內；HE染色觀察腦組織的病理學形態(tài)改變；免疫組化法及Western Bolt法檢測AKT，p-AKT，BAD的表達。
　　結果：1.AdHIF-1α干預組大鼠局灶性神經(jīng)功能缺失體征評分與 CIR組、Ad組比較，72h組大鼠神經(jīng)功能缺失體征評分降低（P＜0.05）。2.TTC染色AdHIF-1α干預組大鼠腦梗死體積百分比分別與CIR組、Ad組比較均有顯著統(tǒng)計學差異（P＜0.01）。3.模型組大鼠腦水含量隨再

4、灌注時間延長，其腦水含量逐漸增加，于24h至48h增長速度最快。AdHIF-1α干預組各時間點腦水含量分別與 CIR組、Ad組相應時間點比較，除6h外，其余各時間點均有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。4.HE染色見AdHIF-1α干預組在腦缺血再灌注72h后神經(jīng)元病理學改變明顯減輕。5.免疫組化法檢測AKT、p-AKT、BAD蛋白的表達：各模型組AKT、p-AKT、BAD蛋白表達總體趨勢相同，即 Sham組各蛋白為弱表達，各模型組蛋白表達2

5、4h達高峰，48h開始下降。（1）AKT、p-AKT：AdHIF-1α干預組各時間點AKT、p-AKT蛋白表達分別與CIR組、Ad組相應時間點比較，除6h外，其余各時間點AKT蛋白表達均具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。（2）BAD：AdHIF-1α干預組各時間點BAD表達分別與CIR組及Ad組相應時間點比較，24h、48h BAD表達具有顯著統(tǒng)計學差異（P＜0.01），6h、72h Bad表達無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。6.Weste

6、rn Bolt法檢測AKT、p-AKT、BAD蛋白的表達：該法檢測各組AKT、p-AKT、BAD蛋白表達高峰時間同免疫組化法。（1）AKT、p-AKT：AdHIF-1α干預組AKT、p-AKT蛋白表達增加，各時間點AKT、p-AKT蛋白表達與CIR組及Ad組相應時間點比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。（2）BAD：AdHIF-1α干預組各時間點BAD蛋白表達減少，各時間點BAD蛋白的表達分別與CIR組、Ad組相應時間點比較，除72h