大鼠急性肺血栓栓塞后VEGF、HIF-1表達(dá)變化及相關(guān)性研究.pdf

1、研究目的：
　　 許多研究表明缺氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）是缺氧應(yīng)答中起重要作用的轉(zhuǎn)因子。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是促進(jìn)血管生長(zhǎng)關(guān)鍵因子。二者在心肌缺血疾病、腦缺血疾病等缺血、缺氧性疾病的研究中存在高表達(dá)，在這些疾病的病理生理過(guò)程中起重要作用。肺栓塞（PE）導(dǎo)致肺損傷，肺氧合功能障礙，從而引起缺氧。在急性肺血栓栓塞癥中，HIF-1、VEGF是否有高表達(dá)?二者是否存在相關(guān)機(jī)制?國(guó)內(nèi)未見(jiàn)明確報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用改良右心導(dǎo)管法制備自

2、體血栓肺栓塞大鼠模型，研究大鼠肺栓塞肺組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、缺氧誘導(dǎo)因子1（HIF-1）的表達(dá)變化，探討PTE后與VEGF、HIF-1α相關(guān)性及可能的作用機(jī)制。
　　 研究方法：
　　 選取Wistar成年大鼠40只，體重250-300g，雄性。隨機(jī)分成5組，分別為正常對(duì)照組、栓塞后1h組、栓塞后6h組、栓塞后12h組、栓塞后24h組，每組8只。
　　 一 建立大鼠急性肺血栓栓塞模型
　　

3、無(wú)菌條件下頸動(dòng)脈取血制成栓子。沿前正中線切口，右頸外靜脈插管注入已制備的血栓。分別于是1、6、12、24h開(kāi)胸取肺組織。正常對(duì)照組注于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)注入同量的生理鹽水，24h開(kāi)胸取肺組織。固定、加蠟包埋。常規(guī)冰箱冷藏。
　　 二 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肺組織HIF-1αVEGF表達(dá)變化
　　 切片，常規(guī)脫臘至水H2O2阻斷，5％BSA血清封閉，加一抗后4℃過(guò)夜，次日依次加生物素標(biāo)記二抗和SABC，經(jīng)DAB顯色，蘇木素復(fù)染，透明，

4、封片，顯微鏡下觀察顯色結(jié)果。
　　 結(jié)果判定 HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞核或胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，按染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞百分比的乘積分為（-）-（+++）.VEGF陽(yáng)性細(xì)胞的判定參照Takahashi等的方法將VEGF表達(dá)分為（-）-（+++）共4級(jí)，以細(xì)胞漿或胞膜呈棕黃色者為陽(yáng)性。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，HIF-1α和VEGF表達(dá)呈等級(jí)分布，比較采用等級(jí)秩和檢驗(yàn)，HIF-1α和VEGF間相關(guān)

5、性采用Spearman相關(guān)分析。
　　 研究結(jié)果：
　　 1、所有栓塞組在注入血栓栓子后，大鼠立刻出現(xiàn)呼吸急促，RR=35±5次/min，心率加快，HR=515±30次/min；口唇及趾端出現(xiàn)明顯紫紺；活動(dòng)明顯減少，多為俯臥位；食欲下降，24h內(nèi)未主動(dòng)進(jìn)食。而對(duì)照組注入生理鹽水后呼吸平穩(wěn)，RR=20±3次/min，心率正常，HR=375±10次/min；未出現(xiàn)紫紺；活動(dòng)如常；主動(dòng)進(jìn)食。
　　 2、栓塞組肺組織HE

6、染色顯示與支氣管伴行的肺動(dòng)脈及其他小血管內(nèi)存在大小不同的栓子，肺栓塞后肺組織呈現(xiàn)彌漫性病變，并且隨栓塞時(shí)間的延長(zhǎng)病理改變逐漸加重。對(duì)照組24小時(shí)后肺組織未見(jiàn)栓塞，結(jié)構(gòu)正常。
　　 3、對(duì)照組大鼠肺組織內(nèi)無(wú)HIF-1α表達(dá)。栓塞組不同時(shí)間點(diǎn)大鼠肺組織細(xì)胞的胞核、胞漿內(nèi)均出現(xiàn)HIF-1α表達(dá)，陽(yáng)性率為100％，表達(dá)強(qiáng)度在“++”-“+++”之間，且隨時(shí)間延長(zhǎng)，高表達(dá)強(qiáng)度增加，12h達(dá)頂點(diǎn)，直至24h保持平穩(wěn)。HIF-1的表達(dá)在栓塞不

7、同時(shí)間組組別間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（H=17.20，P=0.016<0.05）.對(duì)照組大鼠肺組織細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞中VEGF陽(yáng)性表達(dá)率為37.5％，但顯色淺，表達(dá)強(qiáng)度以“+”為主；栓塞組大鼠肺組織VEGF表達(dá)陽(yáng)性率增加，隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，表達(dá)強(qiáng)度以12 h為高，多為“++”、“+++”，直至24h保持平穩(wěn)。VEGF在栓塞不同時(shí)間組組別間表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（H=17.57，P=0.004<0.05）。
　　 4、通過(guò)對(duì)栓塞后不同

8、時(shí)間點(diǎn)大鼠肺組織中HIF-1α和VEGF表達(dá)的動(dòng)態(tài)觀察，發(fā)現(xiàn)兩者表達(dá)強(qiáng)度的增減有相同的趨勢(shì)，呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.600，P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.本實(shí)驗(yàn)以成年Wistar大鼠，通過(guò)改良右心導(dǎo)管法成功制備肺栓塞動(dòng)物模型，具有栓塞率高、可控制性強(qiáng)、存活性好的優(yōu)點(diǎn)，是肺血栓栓塞基礎(chǔ)研究的理想動(dòng)物模型。
　　 2.HIF-1αVEGF在大鼠PTE肺組織中均呈高表達(dá)，且兩者呈正相關(guān)性。提示HIF-1α作為