膽固醇結(jié)石病ABCG5-G8基因的膽囊粘膜表達(dá)以及多態(tài)性的研究.pdf

1、研究背景:膽固醇結(jié)石病是多基因遺傳病.肝臟分泌的膽汁過飽和是膽固醇結(jié)石形成的首要原因.ABCG5和ABCG8基因編碼的蛋白是肝細(xì)胞分泌膽固醇的主要轉(zhuǎn)運體,本課題組曾經(jīng)發(fā)現(xiàn)膽固醇結(jié)石病患者肝臟中的ABCG5和ABCG8表達(dá)增高.有報道ABCG5和ABCG8基因的多態(tài)性能夠影響血脂水平,這對基因也是小鼠致石基因座Lith 9的候選基因.膽囊是結(jié)石形成的場所,膽囊粘膜的膽固醇吸收功能在膽固醇結(jié)石病中可能有代償作用.ABCG5和ABCG8在膽囊

2、粘膜中也有表達(dá),參與膽固醇的轉(zhuǎn)運.同時參與膽囊粘膜吸收膽固醇作用的基因還包括Megalin、Cubilin、SRBI、ABCAl、NPCILl等.核受體是這些基因的反式作用因子,參與它們的轉(zhuǎn)錄調(diào)控.本課題旨在通過比較膽固醇結(jié)石病患者和對照組膽囊粘膜基因表達(dá)差異,以及檢測膽囊結(jié)石病患者和無膽石人群ABCG5和ABCG8基因的多態(tài)性,揭示這些基因在膽固醇結(jié)石病中可能的機(jī)制和相互作用,篩選膽石易感基因. 材料和方法:采集29例膽囊膽固

3、醇結(jié)石病患者和12例無膽石對照的膽囊粘膜、囊壁、膽汁、膽石、靜脈血.Real-time:PCR檢測ABCG5、ABCG8、Megalin、Cubilin、SRBI、ABCAl、NPCIL1,以及核受體LXRa、FXR、LRH-1、RXRα、SHP基因表達(dá).在膽囊癌細(xì)胞株GBC-SD培養(yǎng)液中,分別給予核受體激動劑T0901317、9.順維甲酸、鵝脫氧膽酸,檢測差異基因的表達(dá).采集287例膽囊結(jié)石病患者和223例無膽石人群的靜脈血,提取白細(xì)

4、胞DNA,應(yīng)用PCR-RFLP或Taqman MGB探針方法檢測ABCG5(Q604E)和ABCG8(D19H,Y54C,T400K,A632V)五個常見位點的單核苷酸多態(tài)性,比較基因型和單體性的分布差異.部分研究對象的血清和膽汁進(jìn)行脂質(zhì)分析.比較膽囊粘膜ABCG5和ABCG8基因表達(dá)在不同基因型之間的差異. 結(jié)果：膽石組患者的血清低密度脂蛋白膽固醇濃度顯著高于對照組(P<0.01),膽汁膽固醇摩爾百分比和飽和指數(shù)顯著高于對照組

5、(P<0.01),磷脂、膽汁酸以及總脂濃度低于對照組(P<0.01).膽囊粘膜ABCG5和ABCG8的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.64,P<0.01),膽石組中ABCG5和ABCG8的mRNA表達(dá)分別是對照組的2倍(P<0.01)和1.5倍(P<0.05).ABCG8基因與核受體LXRa(r=0.52,P<0.01)、LRH-1(r=0.66,P<0.01)呈顯著正相關(guān),膽石組中Megalin的mRNA表達(dá)也顯著高于對照組(P<0.05)

6、,與核受體FXR(r=0.48,P<0.01)、SHP(r=0.57,P<0.01)呈顯著正相關(guān).體外培養(yǎng)中FXR的激動劑鵝脫氧膽酸能夠誘導(dǎo)Megalin表達(dá)顯著上調(diào),提示Megalin可能受到FXR調(diào)控.多態(tài)性檢測中發(fā)現(xiàn)ABCG8 T400K在總體中沒有差異,但在男性膽石組中K400顯著高于對照組 (P<0.05).經(jīng)年齡、體重指數(shù)調(diào)整后,男性K400攜帶者患膽石病的危險度比T400純合體增加了約2.12倍(95﹪CI為1.05～4.

7、30,P=0.037).血脂和膽汁分析發(fā)現(xiàn)男性K400攜帶者的血清甘油三酯濃度 (P<0.05)和膽汁磷脂濃度(P<0.05)顯著低于T400純和體.基因表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)K400攜帶者的膽囊粘膜ABCG8 mRNA表達(dá)是T400純合體的1.7倍(P<0.05),ABCG5 mRNA表達(dá)沒有差異.在ABCG5和ABCG8基因的其它四個多態(tài)性位點中未發(fā)現(xiàn)類似差異. 結(jié)論：膽固醇結(jié)石病患者的膽囊粘膜ABCG5和ABCG8基因表達(dá)增高,限制