瘢痕疙瘩RIZ基因和TNFR-Ⅱ基因突變的研究.pdf

1、[目的] 瘢痕疙瘩是整形外科基礎(chǔ)研究的重要課題，其根本形成機(jī)制迄今尚未查明，尋找瘢痕疙瘩的相關(guān)調(diào)控基因已成為當(dāng)前瘢痕研究的熱點之一。本課題組已經(jīng)應(yīng)用比較基因組雜交技術(shù)(CGH)成功構(gòu)建病理性瘢痕染色體變異頻率圖譜，證實在1號染色體短臂末端存在DNA拷貝數(shù)的高頻率缺失，并通過微衛(wèi)星不穩(wěn)定性分析(MSI)發(fā)現(xiàn)在1p36區(qū)域存在基因雜合性缺失(LOH)，提示該區(qū)域可能存在相關(guān)瘢痕抑制基因。DNA測序(DNAsequencing)技術(shù)是

2、一種最為精確的分子診斷技術(shù)，在遺傳性疾病和腫瘤的診斷領(lǐng)域內(nèi)占有重要地位，目前主要應(yīng)用于鑒定基因，檢測突變，分析噬菌體文庫等方面。本課題采用DNA測序技術(shù)，對DNA拷貝數(shù)高頻率缺失的1p36區(qū)域的目前研究熱點基因片段進(jìn)行DNA序列測定，檢測瘢痕疙瘩相關(guān)基因DNA序列變化情況，尋找可能存在的瘢痕疙瘩抑制基因并精確定位其在染色體上的位置，進(jìn)而從基因水平闡明瘢痕疙瘩的發(fā)病機(jī)制，為從基因水平防治瘢痕疙瘩打下堅實基礎(chǔ)。 [方法] 收

3、集患者瘢痕疙瘩組織和血液標(biāo)本，分別抽提出相應(yīng)基因組DNA，在已經(jīng)病理性瘢痕染色體變異頻率圖譜和MSI證實的DNA拷貝數(shù)高頻率缺失的1號染色體1p36區(qū)域，采用目前國外研究報道較多的RIZ基因第8外顯子A(8)和A(9)位點以及TNFR-Ⅱ基因第10外顯子1573片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，回收純化后進(jìn)行基因組DNA測序，將瘢痕組織的DNA序列分別與血液和Genebank的對應(yīng)序列進(jìn)行比較，分析所檢測基因片段的DNA序列變化情況。 [結(jié)果

4、] 將瘢痕組織和血液的相關(guān)基因序列與Genebank的正常序列進(jìn)行比較，所選取的三條基因片段，在血液標(biāo)本中均未發(fā)現(xiàn)突變，而瘢痕疙瘩組織的相關(guān)序列經(jīng)分析提示均有不同程度的突變，而且是多位點、多類型的。具體變化情況如下： (1)RIZ基因第8外顯子A(8)位點：經(jīng)基因序列分析發(fā)現(xiàn)19例患者的瘢痕組織DNA樣本中，有18例發(fā)現(xiàn)突變，突變率為94.74％。共檢測出6種不同的基因突變，其中4種為點突變，2種為移碼突變，其中12例患

5、者的5053編碼子發(fā)生移碼突變，占病例數(shù)的63.16％。瘢痕疙瘩組織中RIZ基因第八外顯子A(8)位點的突變呈多態(tài)性，為多位點、多類型基因突變。 (2)RIZ基因第8外顯子A(9)位點：經(jīng)基因序列分析發(fā)現(xiàn)19例患者的瘢痕組織DNA樣本中，有9例發(fā)現(xiàn)突變，突變率為47.37％。共檢測出9種不同的基因突變，其中7種為點突變，2種為移碼突變。瘢痕疙瘩組織中RIZ基因第八外顯子A(9)位點的突變呈多態(tài)性，為多位點、多類型的基因突變。

6、 (3)TNFR-Ⅱ基因第10外顯子1573片段：經(jīng)基因序列分析發(fā)現(xiàn)19例患者的瘢痕組織DNA樣本中，有10例發(fā)現(xiàn)突變，突變率為52.63％。共檢測出5種不同的基因突變，其中4種為點突變，1種為移碼突變。其中6例患者的1663編碼子發(fā)生移碼突變，占病例數(shù)的31.58％。瘢痕疙瘩組織中TNFR-Ⅱ基因第10外顯子1573片段的突變呈多態(tài)性，為多位點、多類型的。 [結(jié)論] 瘢痕疙瘩組織的3種基因片段中均發(fā)現(xiàn)突變。RIZ基