抗Ⅳ型膠原酶單鏈抗體對博萊霉素誘發(fā)的小鼠肺纖維化的抑制作用.pdf

1、肺纖維化是一種慢性、彌散性肺間質(zhì)病變，表現(xiàn)為進(jìn)行性肺上皮損傷、膠原堆積、肺間質(zhì)纖維化和肺通氣功能障礙。目前針對肺纖維化的傳統(tǒng)治療均缺少明確的依據(jù)且不能改善病人生存率或阻止病程進(jìn)展。 細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的合成與降解平衡被破壞后引起氣道異常?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)降解的一組重要蛋白酶，對肺纖維化的形成有重要作用。Ⅳ型膠原酶也稱為明膠酶(gelatinase)，包括MMP—2和MMP—9，在小鼠肺纖維化過程中起重

2、要作用。在肺纖維化病變早期，Ⅳ型膠原酶參與組織損傷和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的降解，在晚期Ⅳ型膠原酶的表達(dá)水平下降，同時其體內(nèi)天然抑制物TIMP增加，促進(jìn)了膠原的堆積。 本實(shí)驗(yàn)室在前期工作中構(gòu)建了抗Ⅳ型膠原酶單鏈抗體scFv(3G11)，該抗體不僅能夠與Ⅳ型膠原酶結(jié)合并抑制其活性，還能抑制腫瘤細(xì)胞的體外侵襲?？贵w藥物具有特異性和靶向性，用抗MMPs的抗體干預(yù)肺纖維化的研究在國內(nèi)外文獻(xiàn)中尚未見有報(bào)道。本研究利用博萊霉素(BLM)誘導(dǎo)的

3、小鼠肺纖維化模型，探討早期阻斷肺纖維化發(fā)生或發(fā)展的策略，研究scFv(3G11)對小鼠肺纖維化的預(yù)防或治療作用。 抗Ⅳ型膠原酶單鏈抗體scFv(3G11)由工程菌發(fā)酵、純化得到。以ELISA和免疫細(xì)胞化學(xué)熒光染色法檢測抗體的免疫活性，明膠酶譜法檢測藥物對Ⅳ型膠原酶活性的抑制作用。通過氣管內(nèi)注射博萊霉素建立小鼠肺纖維化模型，腹腔注射scFv(3G11)進(jìn)行治療。小鼠肺組織HE染色石蠟切片觀察肺形態(tài)變化，以羥脯氨酸含量評價肺膠原沉積

4、。 研究結(jié)果顯示，經(jīng)scFv(3G11)治療處理后，30mg/kg和45mg/kg劑量組的羥脯氨酸增加值與BLM組相比分別下降45.3％和52.7％。肺病理切片顯示纖維化程度降低。病理圖像分析表明，治療組與BLM組相比，有核細(xì)胞數(shù)減少，肺泡隔所占面積顯著減少。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示，scFv(3G11)能與巨噬細(xì)胞結(jié)合并抑制其分泌的Ⅳ型膠原酶活性。因此得出結(jié)論，抗Ⅳ型膠原酶單鏈抗體能抑制Ⅳ型膠原酶的活性，并能抑制博萊霉素誘