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文檔簡介
1、本論文研究工作為“國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目—乳香-沒藥對藥協(xié)同增效及其分子機(jī)制研究”的部分研究內(nèi)容。
第一章較為系統(tǒng)地綜述了乳香、沒藥化學(xué)成分和藥理活性研究進(jìn)展及其藥對配伍研究現(xiàn)狀,為深入開展研究工作提供一定參考。
第二章對收集的不同批次乳香、沒藥藥材進(jìn)行質(zhì)量分析與綜合評價(jià)。采用GC-MS法對乳香、沒藥中揮發(fā)性成分進(jìn)行分析鑒定;采用HPLC-PDA法分析乳香、沒藥中非揮發(fā)性成分,并采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)
2、系統(tǒng)》(2004A版)和SPSS16.0軟件進(jìn)行相似度評價(jià)和主成分分析。主要結(jié)論如下:
1、GC-MS分析鑒定了乳香揮發(fā)油中的12個(gè)揮發(fā)性成分,相似度分析表明收集于廣東藥材公司乳香樣品之間的相似度較高(相似系數(shù)為0.940);其次為收集于云南藥材公司和南京藥材公司的乳香樣品相似度較高(相似系數(shù)為0.934);主成分析結(jié)果表明揮發(fā)性成分中二萜烯類成分對乳香質(zhì)量影響最為顯著。乳香非揮發(fā)性成分相似度分析表明:收集于云南藥材公司和
3、廣東藥材公司的樣品相似度最高(相似系數(shù)為0.972);其次為收集于廣東藥材公司和于南京藥材公司的樣品相似度也較高(相似系數(shù)為0.960);主成分分析表明非揮發(fā)性成分中乳香酸類成分對乳香質(zhì)量影響最為顯著。綜合評價(jià)結(jié)果認(rèn)為:收集于廣東的乳香藥材質(zhì)量較其他省區(qū)收集的乳香藥材為優(yōu)。
2、GC-MS法分析鑒定了沒藥中28個(gè)化學(xué)成分,建立了不同批次沒藥藥材非揮發(fā)性成分的HPLC特征圖譜;兩類指紋圖譜相似度分析結(jié)果均表明:收集于不同批次
4、的沒藥藥材相似性較差,其中收集于海南和廣東的藥材相似度較高;主成分分析結(jié)果表明倍半萜烯類成分、有機(jī)酸酯類成分和二萜酸類成分對藥材品質(zhì)起到主導(dǎo)作用。綜合分析提示,收集于海南藥材公司的沒藥藥材質(zhì)量較佳。
第三章對乳香沒藥配伍前后生物效應(yīng)進(jìn)行了評價(jià)。
1、通過對乳香-沒藥配伍的抗炎鎮(zhèn)痛活性進(jìn)行評價(jià),初步分析兩藥配伍的協(xié)同/拮抗作用。
(1)甲醛致小鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)表明:沒藥水提物(MWE)與乳沒合煎提取物
5、(CWE)對甲醛致小鼠足腫脹均有顯著抑制作用,而乳香提取物(FEW)未見明顯抑制作用。提示乳香、沒藥配伍可能存在一定的拮抗作用;另外各組均具有顯著的抑制足腫脹組織中PGE2的含量(p<0.01或p<0.05),且CWE活性介于MWE、FWE之間,提示兩者之間可能存在拮抗效應(yīng)。
(2)角叉菜膠誘導(dǎo)小鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)表明:給藥1h后,MWE可以非常顯著降低小鼠足腫脹程度(p<0.01),2h后仍具藥效(p<0.01);而FWE在3
6、h時(shí)效果顯著;CWE在2、3h時(shí)顯示出非常顯著的降低小鼠足腫脹度(p<0.01)。研究結(jié)果顯示MWE、FWE配伍后效果顯著增強(qiáng),說明兩者之間存在明顯的協(xié)同增效作用;MWE、FWE、CWE均可降低NO含量,且CWE效果優(yōu)于MWE和FWE,提示兩者配伍存在協(xié)同增效的作用。 7、明顯。各組的潛伏期與模型組相比均明顯延長,但組間差異不明顯。MWE體重變化有明顯差異,方差分析得組間有顯著性差異。結(jié)果表明乳香、沒藥對藥配伍前后均具有一定的鎮(zhèn)痛活性,且乳香、沒藥配伍后鎮(zhèn)痛效果較乳香、沒藥單獨(dú)使用效果增強(qiáng)。 8、伍后具有協(xié)同增效作用,其活性強(qiáng)于各單用提取物的活性;TT實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明:乳香、沒藥不同提取物均能顯著延長家兔血漿凝血時(shí)間,配伍后除乳香水提物與沒藥水提物配伍具有拮抗作用外,其余配伍組合均具有協(xié)同增效作用。 9、高劑量下均顯示顯著或非常顯著的抗凝血作用(P<0.05或P<0.01或P<0.001),且乳香沒藥兩藥配伍后,水提取物組抗凝血作用強(qiáng)于相應(yīng)醇提取物組及乳香、沒藥單用組。研究結(jié)果可以看出,醇提取物更偏向于對PT的影響,而對TT影響相對較弱;水提取物則偏向于對TT的影響,對PT影響相對較弱。 10、,結(jié)果表明:共鑒定了83個(gè)化學(xué)成分,其中乳香22個(gè),沒藥37個(gè)。乳香揮發(fā)油中檢測出的4-香芹草孟烯醇、牛龍牛兒醇乙酸酯、醋酸癸酯、鄰苯二甲酸二乙酯和沒藥揮發(fā)油中檢出的γ-芹子烯、β-杜松烯、新異長葉烯、(E,E)-3,7-二甲基-10-(1-甲基亞乙基)-3,7-環(huán)癸二烯-1-酮在各配伍藥對所提出的揮發(fā)油中均未檢出。而相對于單煎所得的揮發(fā)油,各配伍藥對揮發(fā)油中新增成分28個(gè),如a-紫穗槐烯、a-芹子烯、莪術(shù)烯、吉馬酮等。兩藥不同比例配伍 11、后化學(xué)成分存在變化,其中1:3配伍比例的藥對揮發(fā)油中化學(xué)成分最為豐富,鑒定了其中66個(gè)化學(xué)成分,新增成分最多為23個(gè)。提示兩藥配伍后共煎過程中存在著化學(xué)成分的增溶、抑溶以及相互轉(zhuǎn)化的過程,其轉(zhuǎn)化機(jī)制及其與效應(yīng)之間的關(guān)聯(lián)有待深入研究。 12、具有相似性,同時(shí)存在差異性特征,說明兩藥配伍比例不同其化學(xué)組成存在一定差異,兩藥配伍可能促進(jìn)萜及萜酸類成分的溶出;也提示化學(xué)成分的變化可能是引起生物效應(yīng)差異的基礎(chǔ)。 13、特征吸收峰并未在各比例配伍藥對光譜中出現(xiàn);在各比例配伍藥對中有新的特征吸收峰出現(xiàn),同時(shí)吸收峰位置發(fā)生改變,說明各化學(xué)基團(tuán)在單味藥及各比例配伍藥對的成分中所處的化學(xué)環(huán)境不同。這可能是在煎煮各比例配伍藥對時(shí)發(fā)生了化學(xué)反應(yīng),有新物質(zhì)的生成。不同比例配伍藥對所包含的藥物成分并非是單味乳香、沒藥所含藥物成分的簡單相加。為進(jìn)一步探討兩藥配伍前后化學(xué)成分的變化及轉(zhuǎn)化提供一定的參考和指引。
(3)小鼠原發(fā)性痛經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明:小鼠扭體次數(shù)由小到大依次為:CWE
2、乳香、沒藥水提物、揮發(fā)油及其配伍組合體外對ADP誘導(dǎo)的家兔血小板聚集及對抗凝血酶實(shí)驗(yàn)表明:血小板聚集實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)乳香、沒藥提取物及其不同配伍組合均能顯著或非常顯著抑制ADP誘導(dǎo)的家兔血小板聚集,且兩藥配
3、對不同比例配伍乳香沒藥對藥的凝血功能進(jìn)行了評價(jià),PT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:水提物組未顯示明顯的抗凝血活性(P>0.05),醇提物組抗凝血作用強(qiáng)于相應(yīng)水提物組;TT研究表明:與對照組相比,不同配比的乳香-沒藥藥對水、醇提取物
第四章對乳香-沒藥對藥配伍的物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行了研究。
1、采用GC-MS對乳香、沒藥藥材及其不同配伍比例的藥對揮發(fā)油進(jìn)行了分析
2、采用紫外譜線組法對乳香沒藥不同比例配伍藥對水提取液、50%乙醇提取液的紫外吸收特征進(jìn)行分析,探討兩藥不同比例配伍的化學(xué)成分的變化特征,結(jié)果表明:不同比例配伍乳香.沒藥對藥提取液紫外吸收特征
3、采用紅外光譜技術(shù)的宏觀指紋特性對不同配伍方式的乳香-沒藥藥對物質(zhì)組成進(jìn)行分析,從整體觀的角度定性地刻畫不同配伍方式藥對的共性和特性,結(jié)果表明:在乳香、沒藥不同比例配伍藥對水提液和醇提液中保留了相應(yīng)單味藥水提液和醇提液中的某些特征基團(tuán);單味藥光譜中的某些集團(tuán)
4、采用硅膠柱層析方法進(jìn)行反復(fù)分離純化乳香二氯甲
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