microRNA-200c調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細(xì)胞對(duì)吉非替尼抵抗的機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　結(jié)腸癌是人類(lèi)最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)。目前臨床治療上以手術(shù)和化療為主。此外，針對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）家族的靶向治療藥物（如吉非替尼）也已應(yīng)用于臨床多年。盡管多項(xiàng)臨床前研究均已證實(shí)吉非替尼較好的抗腫瘤活性，進(jìn)一步的臨床研究卻發(fā)現(xiàn)，有較高比例患者對(duì)該類(lèi)治療存在原發(fā)或繼發(fā)性耐受。因此，為預(yù)測(cè)患者對(duì)治療的敏感性，選擇可受益患者接受治療，有必要進(jìn)一步探討吉非替尼的耐受機(jī)制。近年研究發(fā)現(xiàn)在膀胱癌及

2、非小細(xì)胞肺癌中，microRNA-200c及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）與EGFR抑制劑療效敏感性之間具有密切聯(lián)系。
　　目的：探討結(jié)腸癌細(xì)胞中microRNA-200c及EMT表型與EGFR抑制劑療效敏感性間的關(guān)系
　　方法：
　　1. qRT-PCR法、western blot法檢測(cè)四株結(jié)腸癌細(xì)胞中EMT相關(guān)基因表達(dá)情況。
　　2. qRT-PCR法檢測(cè)四株結(jié)腸癌細(xì)胞中microRNA-200c表達(dá)水平
　　

3、3. CCK-8法檢測(cè)四株結(jié)腸癌細(xì)胞對(duì)吉非替尼的藥物敏感性。
　　4.外源性上調(diào)或下調(diào) microRNA-200c表達(dá)，觀察 EMT相關(guān)基因表達(dá)變化
　　5.外源性上調(diào)或下調(diào)microRNA-200c表達(dá)，觀察其對(duì)吉非替尼敏感性的影響。
　　結(jié)果：
　　1.四株結(jié)腸癌細(xì)胞系之間存在明顯的EMT表型差異，HT29細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)量最高，vimentin及ZEB1表達(dá)缺失，HCT116及SW480細(xì)胞中

4、E-cadherin表達(dá)量依次降低，SW620細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)量最低，且間質(zhì)細(xì)胞表型標(biāo)志分子vimentin及ZEB1呈高表達(dá)。
　　2. microRNA-200c在HT29中表達(dá)量最高，在HCT116和SW480中表達(dá)較高但均低于HT29中表達(dá)量，在SW620中表達(dá)水平極低。
　　3. HT29對(duì)吉非替尼最為敏感，HCT116和SW480為中度敏感；而SW620對(duì)吉非替尼相對(duì)不敏感。
　　4.在HT2

5、9細(xì)胞中下調(diào)microRNA-200c表達(dá)后，ZEB1 mRNA表達(dá)水平明顯上調(diào)（蛋白水平表達(dá)極低，轉(zhuǎn)染前后均檢測(cè)不出），E-cadherin表達(dá)明顯下調(diào)，vimentin表達(dá)明顯上調(diào)；SW620細(xì)胞中過(guò)表達(dá)microRNA-200c后，ZEB1明顯下調(diào)，E-cadherin明顯上調(diào)，vimentin明顯下調(diào)。
　　5.在 HT29細(xì)胞中下調(diào) microRNA-200c表達(dá)后，其對(duì)吉非替尼敏感性明顯降低；而上調(diào) microRNA-