Ⅰ型膠原纖維降解對(duì)牙本質(zhì)粘結(jié)強(qiáng)度影響的研究.pdf

1、口腔粘結(jié)學(xué)，是近代口腔醫(yī)學(xué)發(fā)展最為迅速、最為有效的新技術(shù)之一，是現(xiàn)代牙科美容修復(fù)及口腔保存修復(fù)的重要基礎(chǔ)。目前，酸蝕技術(shù)的應(yīng)用使牙釉質(zhì)粘結(jié)獲得了較理想的粘結(jié)強(qiáng)度，但由于牙本質(zhì)自身結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，它與不同粘結(jié)系統(tǒng)的粘結(jié)效果及持久性仍是一個(gè)技術(shù)難點(diǎn)。
　　作為牙本質(zhì)有機(jī)物主要成分的膠原纖維，是牙本質(zhì)粘結(jié)界面的主要成分之一。在完全去除或保留玷污層后，粘結(jié)劑與牙本質(zhì)脫礦后暴露的膠原纖維網(wǎng)相互作用形成了混合層。但是，無(wú)論是全酸蝕還是自酸蝕粘結(jié)

2、系統(tǒng)，形成的混合層在長(zhǎng)期受到口內(nèi)環(huán)境中水及酶等各種因素的影響下，未聚合的樹(shù)脂單體及水溶性分子會(huì)從膠原纖維的表面剝脫，導(dǎo)致膠原纖維暴露，而暴露的膠原纖維有可能在牙本質(zhì)內(nèi)固有的基質(zhì)金屬蛋白酶的作用下發(fā)生降解，使混合層的有機(jī)成分損耗，引起粘結(jié)界面的退行性變，導(dǎo)致粘結(jié)破壞。因此，粘結(jié)界面混合層內(nèi)膠原纖維的降解對(duì)于牙本質(zhì)粘結(jié)強(qiáng)度及耐久性的影響不僅是粘結(jié)降解機(jī)理中亟待解決的問(wèn)題，而且問(wèn)題的解決有可能推動(dòng)粘結(jié)退化理論的進(jìn)一步發(fā)展。
　　本課題首

3、先從膠原降解量和膠原纖維形態(tài)學(xué)兩個(gè)方面，評(píng)價(jià)了牙本質(zhì)粘結(jié)的首要步驟——酸蝕對(duì)于牙本質(zhì)內(nèi)I型膠原纖維降解的影響；進(jìn)而對(duì)牙本質(zhì)進(jìn)行不同粘結(jié)系統(tǒng)及浸泡老化處理，通過(guò)微拉伸實(shí)驗(yàn)測(cè)定牙本質(zhì)粘結(jié)強(qiáng)度；同時(shí)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法定量測(cè)定膠原降解水平，免疫膠體金技術(shù)與場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡相結(jié)合對(duì)粘結(jié)界面混合層膠原纖維的降解以及混合層形態(tài)進(jìn)行微觀分析，探討I型膠原纖維降解以及粘結(jié)強(qiáng)度隨時(shí)間的變化趨勢(shì)，以及兩者的相關(guān)關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)的實(shí)施為牙本質(zhì)粘結(jié)耐久性的研究提供了直

4、接理論基礎(chǔ)和一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1.酸蝕時(shí)間對(duì)牙本質(zhì)內(nèi)I型膠原纖維降解量影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著37％磷酸處理牙本質(zhì)時(shí)間的延長(zhǎng)，膠原降解量呈增加趨勢(shì)，酸蝕60s降解的膠原最多，為4.86(1.55)mg/g，30s次之，為2.76(0.87)mg/g，15s組為1.93(0.88)mg/g，10s膠原降解量較少，為0.95(0.38)mg/g，空白對(duì)照組也有少量降解，為0.06(0.03)mg/g，

5、兩兩比較，各組間均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.005)。
　　2.酸蝕時(shí)間對(duì)于牙本質(zhì)內(nèi)I型膠原纖維形態(tài)學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過(guò)場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡觀察，37％磷酸酸蝕處理牙本質(zhì)10s可清除玷污層，但微粒樣物質(zhì)仍覆蓋于牙本質(zhì)小管口及膠原纖維表面。酸蝕15s可使牙本質(zhì)小管口清晰開(kāi)放，可觀察到主纖維及球狀附著物。酸蝕30s暴露的膠原纖維表面更加光滑，球狀附著物減少，可觀察到次級(jí)纖維。酸蝕60s暴露的次級(jí)纖維數(shù)量增加，主纖維數(shù)量減少，牙本質(zhì)小管管

6、內(nèi)結(jié)構(gòu)塌陷，存在纖維斷裂的征象。
　　3.浸泡老化對(duì)不同牙本質(zhì)粘結(jié)系統(tǒng)粘結(jié)強(qiáng)度影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，一步自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)的即刻粘結(jié)強(qiáng)度為24.07±7.47MPa，顯著低于兩步自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)29.53±7.13MPa及全酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)29.81±7.34MPa，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。隨著人工唾液浸泡時(shí)間增長(zhǎng)，各粘結(jié)系統(tǒng)的粘結(jié)強(qiáng)度均有所下降。浸泡1月，一步自酸蝕系統(tǒng)的粘結(jié)強(qiáng)度為22.11±7.16MPa，顯著低于兩步自酸蝕系統(tǒng)2

7、8.88±10.52MPa及全酸蝕系統(tǒng)28.25±9.32MPa，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；浸泡4月，一步自酸蝕系統(tǒng)的粘結(jié)強(qiáng)度為20.55±6.06MPa，均數(shù)低于全酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)21.21±6.39MPa，高于兩步自酸蝕系統(tǒng)18.96±5.31MPa，但組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。對(duì)于一步自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)，其粘結(jié)強(qiáng)度的均數(shù)隨浸泡時(shí)間延長(zhǎng)而降低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；對(duì)于兩步自酸蝕系統(tǒng)及全酸蝕系統(tǒng)，各自浸泡4月的粘結(jié)強(qiáng)度顯著低于浸泡1月以及即刻組，具

8、有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。在即刻、浸泡1月、4月3個(gè)時(shí)間點(diǎn)，兩步自酸蝕系統(tǒng)和全酸蝕系統(tǒng)的粘結(jié)強(qiáng)度兩兩比較，均未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4.浸泡老化及不同粘結(jié)系統(tǒng)對(duì)牙本質(zhì)內(nèi)I型膠原纖維降解量影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，一步自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)的即刻膠原降解量為0.18±0.01mg/g，顯著高于兩步自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)0.16±0.01mg/g以及全酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)0.15±0.01mg/g，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。隨著人工唾液浸泡時(shí)間延長(zhǎng)，各粘結(jié)

9、系統(tǒng)的膠原降解量均隨之增高。浸泡1月，兩步自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)膠原降解量為0.16±0.01mg/g，顯著低于全酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)0.18±0.01mg/g和一步自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)0.19±0.02mg/g，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。浸泡4月，一步自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)的膠原降解量為0.26±0.01mg/g，兩步自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)為0.21±0.02mg/g，全酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)為0.19±0.02mg/g，組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。對(duì)于全酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)

10、，即刻膠原降解量顯著低于浸泡1月及4月組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示其在浸泡初期出現(xiàn)了膠原的大量降解；對(duì)于一步自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)和兩步自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)，浸泡4月的降解量顯著高于1月及即刻組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，提示自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)是隨著浸泡時(shí)間的延長(zhǎng)，呈現(xiàn)膠原降解量的逐漸增多。一步自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)，較兩步自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)，各時(shí)間點(diǎn)的膠原降解量大，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　5.牙本質(zhì)內(nèi)I型膠原纖維降解量與粘結(jié)強(qiáng)

11、度相關(guān)性分析的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，I型膠原纖維降解量與牙本質(zhì)粘結(jié)強(qiáng)度存在相關(guān)關(guān)系(r=－0.65,P=0.003)，并且牙本質(zhì)粘結(jié)強(qiáng)度隨著I型膠原纖維降解量的增加而下降。
　　6.牙本質(zhì)內(nèi)I型膠原纖維免疫標(biāo)記定性觀察分析的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，通過(guò)場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡觀察，牙本質(zhì)脫礦后暴露的I型膠原纖維，可以結(jié)合抗I型膠原單克隆抗體以及膠體金標(biāo)記的相應(yīng)二抗，膠體金標(biāo)記顆粒分布均勻，可與暴露的膠原纖維上的特定位點(diǎn)結(jié)合，實(shí)現(xiàn)免疫定位，通過(guò)這種方法，可以直

12、觀觀察膠原纖維網(wǎng)絡(luò)的立體的空間結(jié)構(gòu)。
　　7.浸泡老化及不同牙本質(zhì)粘結(jié)系統(tǒng)對(duì)粘結(jié)界面混合層形態(tài)學(xué)影響的微觀分析的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，全酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)形成的粘結(jié)界面混合層厚度不均，可見(jiàn)較長(zhǎng)的樹(shù)脂突，伸向牙本質(zhì)小管側(cè)壁的樹(shù)脂突起，結(jié)合二次電子和背散射電子成像，混合層表現(xiàn)出廣泛的免疫標(biāo)記，特別是深層較淺層的膠體金標(biāo)記指數(shù)高；兩步自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)可見(jiàn)致密均一的混合層以及樹(shù)脂突，但膠體金標(biāo)記較少；一步自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)形成的混合層存在孔洞樣缺陷，個(gè)別樹(shù)脂

13、突形態(tài)存在斷裂現(xiàn)象，膠體金顆粒于混合層內(nèi)均勻分布。浸泡1月，各粘結(jié)系統(tǒng)均表現(xiàn)出混合層免疫標(biāo)記的減少，全酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)向牙本質(zhì)小管側(cè)壁伸出的樹(shù)脂突起減少，一步自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)樹(shù)脂突的數(shù)量明顯減少。浸泡4月，各粘結(jié)系統(tǒng)均出現(xiàn)混合層結(jié)構(gòu)的破壞，全酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)混合層個(gè)別區(qū)域出現(xiàn)微小裂隙，自酸蝕粘結(jié)系統(tǒng)則出現(xiàn)了明顯裂縫，免疫標(biāo)記進(jìn)一步減弱。
　　綜上所述，作為牙本質(zhì)有機(jī)基質(zhì)的主要成分，I型膠原的降解對(duì)于牙本質(zhì)粘結(jié)強(qiáng)度及耐久性具有重要的意義。酸蝕