棉酚與甾體激素聯(lián)合用藥對(duì)大鼠生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)及生精干細(xì)胞功能的影響.pdf

1、經(jīng)過近十年的不懈努力,我們?cè)O(shè)計(jì)了低劑量棉酚與甾體類激素聯(lián)合用藥的方案并取得了可喜的成果.此種用藥方案用藥量少、服用方便且起效快,并克服了原來(lái)單獨(dú)用藥所造成的毒副作用和種種不便,從而更加接近于理想化避孕藥的標(biāo)準(zhǔn).在以往實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上,我們建立了低劑量棉酚聯(lián)合甲基睪丸酮和炔雌醇的用藥方案,結(jié)果表明每日給雄性Wistar大鼠進(jìn)行食道灌喂12mg/kg棉酚加20mg/kg甲基睪酮和100μg/kg炔雌醇六周可以誘導(dǎo)雄性大鼠不育.停藥六周后服藥

2、的大鼠能夠自主恢復(fù)生殖能力,其產(chǎn)生的后代在經(jīng)過一系列實(shí)驗(yàn)檢測(cè)后被證明為各項(xiàng)功能正常.在初步的研究中我們發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥沒有對(duì)喂藥大鼠體內(nèi)各個(gè)臟器造成嚴(yán)重?fù)p害.對(duì)生殖細(xì)胞的作用表現(xiàn)為抑制精子產(chǎn)生的數(shù)量和質(zhì)量,并且還能夠破壞精子的運(yùn)動(dòng)功能.由于藥物對(duì)某個(gè)系統(tǒng)產(chǎn)生的影響可能是通過作用于該系統(tǒng)中不同種類和分化程度不同的細(xì)胞來(lái)實(shí)現(xiàn)的,因此為了進(jìn)一步探討棉酚與甾體激素聯(lián)合用藥的抗生育機(jī)理和其安全性,本課題研究了低劑量(12mg/kg/d)和高劑量棉酚(

3、50mg/kg/d)與激素(20mg/kg/d甲基睪酮和100μg/kg/d炔雌醇)聯(lián)合用藥對(duì)生精細(xì)胞凋亡、凋亡相關(guān)基因表達(dá)和生精干細(xì)胞生長(zhǎng)分化功能的影響.在課題的第一部份,首先建立了人工隱睪大鼠模型,此模型大鼠的睪丸通過手術(shù)被固定在大鼠的腹腔壁上,手術(shù)后睪丸內(nèi)的生精細(xì)胞被腹腔內(nèi)的溫度誘發(fā)凋亡.提取凋亡生精細(xì)胞內(nèi)的總RNA,利用RT-PCR的方法擴(kuò)增到了凋亡相關(guān)的bax,fas,caspase-3和caspase-9基因片段,并構(gòu)建入質(zhì)

4、粒載體作為原位雜交檢測(cè)凋亡相關(guān)基因表達(dá)的探針庫(kù).在研究的第二部分采用了生精干細(xì)胞移植的方法檢測(cè)了聯(lián)合用藥對(duì)喂藥大鼠生精干細(xì)胞生長(zhǎng)分化功能的影響情況.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,高劑量棉酚加激素(50mg G+H)喂藥組的大鼠喂藥六周后部分曲細(xì)精管內(nèi)出現(xiàn)了生精細(xì)胞從小管管壁剝脫的現(xiàn)象,然而在低劑量棉酚加激素(12mg G+H)喂藥組的大鼠曲細(xì)精管內(nèi)生精上皮卻保持完整.生精干細(xì)胞移植實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示:在干細(xì)胞移植二至三個(gè)月后,無(wú)論是在接受來(lái)自于50mg G